RNA恒溫快速擴增試劑盒（基礎型）-II使用說明書
【產品名稱】
通用名稱：RNA恒溫快速擴增試劑盒（基礎型）-II
【包裝規格】
貨號：WLRB8207KIT
規格：48份/盒
【原理概述】
本試劑盒基于一種常溫恒溫核酸快速擴增技術：在恒溫條件下（42 °C），特殊修飾的反轉錄酶利用特異性引物DNA和模板RNA合成cDNA鏈，反應體系中的重組酶、單鏈DNA結合蛋白和DNA聚合酶以新合成的cDNA鏈為模板進行快速核酸擴增反應。適用于實驗室級別的RNA擴增以及其他檢測用途的RNA擴增使用。
【產品特點】
本試劑盒具有靈敏度高、特異性強、反應時間短（僅需30 min）等優點，反應組分為干粉狀態，操作簡便，易于保存。
本試劑對設備要求低，金屬浴、水浴鍋等即可進行反應操作，無需購買PCR擴增儀等價格高昂的設備。
【引物設計】
建議使用長度在 30-35 bp的引物，引物過短會影響擴增速度和檢測靈敏度；引物設計避免形成二級結構而影響擴增；擴增子長度建議在150-500 bp。
【試劑盒組成】
組成 | 含量 |
A buffer | 1.6 mL×1管 |
B buffer | 150 μL×1管 |
試劑 | 48份 |
使用說明書 | 1份 |
注：考慮到核酸降解問題，RNA系列產品不提供正對照模板和引物。
【試劑盒儲存】
1．運輸溫度：≤ 20 oC的恒溫環境；
2．儲存條件：儲存溫度 ≤ -20 °C（± 5 °C）恒溫環境，避光保存，避免重壓、反復凍融；
3．產品有效期：14個月；
4．生產日期見外包裝。
【操作步驟】
提前30分鐘將試劑盒所需組分取出，室溫融化，震蕩混勻。
(1) 每個干粉反應管加入29.4 μL A buffer（注意：A buffer需融化混勻，否則會對實驗效果產生影響）；
(2) 每個反應管分別加入2 μL上游引物和2 μL下游引物（引物濃度10 μM，對于多個反應、步驟1和步驟2可以混合后再分裝至反應管中）；
(3) 向反應管中依次加入2 μL ~ 14.1 μL核酸模板（可根據實際需求調整加入模板的體積，并相應調整加入的ddH2O體積，至模板與ddH2O總體積為14.1 μL）；
(4) 最后向反應管中加入2.5 μL B buffer并充分混合（請務必上下顛倒甩動反應管8-10次進行混勻；對于多個反應，建議將B buffer加至反應管的蓋子內側上下顛倒后混勻）；
(5) 混勻后，將反應液甩（或快速離心）至管子底部，然后立即將反應管放入恒溫設備中42 oC孵育30 min；
(6) 反應結束后，加入Tris飽和酚/氯仿/異戊醇（25：24：1）抽提液，1:1混勻抽提反應液，12000 rpm離心5 min，取5 μL上清進行瓊脂糖凝膠電泳檢測。（瓊脂糖凝膠濃度建議為1.5%-2%）。注：
1. 高溫變性不能有效去除蛋白，可能對產物分析造成影響；
2. 市場上部分擴增產物純化試劑盒
不適用，可能造成假陰性結果。
體系配制
組分 | 體積（μL） |
A buffer | 29.4 |
上游引物(10 μM) | 2 |
下游引物(10 μM) | 2 |
ddH2O和RNA模板 | 14.1 |
B buffer | 2.5 |
總體積 | 50 |
【注意事項】
1．由于試劑盒靈敏度非常高，在進行反應時請注意避免核酸污染，并設置空白對照；
2．使用時請取出實驗所需的MIRA反應單元的數量，剩余部分請置于存儲條件下。
