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生化試劑---試劑空白探討

閱讀:450發布時間:2015-3-12

生化試劑是指有關生命科學研究的生物材料或有機化合物,以及臨床診斷、醫學研究用的試劑。

試劑空白吸光度是反映試劑質量的指標之一,但不能反映試劑質量的全部。試劑成份、純度、用量及穩定性,才是保證試劑質量的關鍵所在。目前市售的一些試劑具有抗干擾作用,主要是通過加入抗干擾物質或使用新的色素原以避免內源性物質的干擾。但值得注意的是:一些試驗項目在消除內源性物質干擾的同時,會帶來樣品含量真實性的變化。

試劑空白吸光度是反映試劑質量的指標之一。每種試劑都有一定的空白吸光度范圍,試劑空白吸光度的改變往往提示該試劑的變質;如利用Trinder反應為原理的檢測試劑會因含酚類物質被氧化為醌而變為紅色。堿性磷酸酶、r一谷氨酰轉肽酶、*等檢測試劑會因基質分解出硝基酚或酚基苯胺而變黃。有些試劑久置后變渾濁。這些情況均可使空白吸光度升高。*氨基轉移酶、天冬氨酸氨基轉移酶等負反應,在放置過程中其試劑空白吸光度會因NADH自行氧化為NAD+而下降。原則上,吸光度上升的反應,其試劑空白吸光度越低越好,不能超過一個高限;相反,吸光度下降的反應,其試劑空白吸光度不能低于一個低限。因此,試劑空白吸光度限值,常作為程序參數輸入儀器,如經核查超限,儀器會自動報警,提示更換試劑。需要指出的是,還原型輔酶I(II)等投料量不足或劣質的原料,往往需要加大用量,才使“表觀"吸光度上升,湊合過試劑空白核對的“關",其后果為如下情況:1.線性范圍變窄 現象:高值測不高。原因:生產試劑時有效成分投料量不足;試劑成份穩定性較差。2.靈敏度變低現象:酶促反應速度曲線斜率下降,測定結果有嚴重系統誤差。原因:試劑底物濃度不足。3.低值偏高 現象:試劑空白的變化曲線(吸光度VS時間)明顯波動。原因:試劑自身不穩定,自行分解;工具酶純度不夠,雜酶含量超限,導致干擾作用。


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