2016年3月8號星期五，我司銷售部業務員王接到來自廣西醫科大學的劉同學的咨詢來電，劉同學不久后將面臨論文答辯。劉同學導師給予她一個月完成人2,3-二磷酸甘油酸(2,3-DPG)ELISA的實驗。但由于之前沒有接觸過該實驗，對于ELISA實驗如何作標準曲線圖表示很茫然。在了解到該情況后，吳讓我司技術部發來關于做標準曲線圖的詳細相關介紹供劉同學參考。在此也希望能夠幫助到遇到同樣有這個問題的客戶。以下是關于ELISA實驗標準曲線圖的注意事項及擬合方程的選擇：
1、樣品的濃度等指標是根據標準曲線計算出來的，所以首先要把做標準曲線看作是比做正式實驗還要重要的一件事，否則后面的實驗結果無從談起。
2、設置標準曲線樣品的標準濃度范圍要有一個比較大的跨度，并且要能涵蓋你所要檢測實驗樣品的濃度，即樣品的濃度要在標準曲線濃度范圍之內，包括上限和下限。而對于呈S型的標準曲線，盡量要使實驗樣品的濃度在中間坡度zui陡段，即曲線幾乎成直線的范圍內。
3、采用倍比稀釋法配制標準曲線中的標準樣品濃度，這樣就能夠保證標準樣品的濃度不會出現較大的偏離。
4、檢測標準樣品時，應按濃度遞增順序進行，以減少高濃度對低濃度的影響，提高準確性。
5、標準曲線的樣品數一般為7個點，但至少要保證有5個點。
6、做出的標準曲線相關系數因實驗要求不同而有所變動，但一般來說，相關系數R至少要大于0.98，對于有些實驗，至少要0.99甚至是0.999.
標準曲線圖的擬合方程
在S曲線的低濃度部門可以用乘冪方程很好的擬合，中低濃度部門可以用直線方程，中間部門可用對數方程，而中后段可用四參數。免疫檢測時尺度點（可以是倍比稀釋的，也可以不是）濃度假如和相應的吸光度（OD）值假如能夠呈現直線關系當然是的了，這時可以通過EXELL等利便的獲得擬合曲線，進而推算出樣品的濃度值。
關于尺度曲線的擬合方式，直線、二次曲線、三次曲線、指數、對數等雖都可用于ELISA及其它生物學反應中的曲線擬合，但都只合用于曲線的一部分，有的合用于前半段，有的合用于后半段，有的合用于中間一段，而Logistic曲線則對曲線的全部都有較好的合用性。在一個長的區間內，Logistic應該都能擬合得較為理想。假如用來定量，S形曲線的中間段（較陡處）是比較好的，而兩真個平坦部門計算誤差會大，有時甚至會很大。用于免疫檢測的所謂“尺度曲線”實在稱為擬合曲線比較合適。目前上zui流行的免疫檢測擬合方式是“四參數邏輯擬合”，用這種擬合方式往往能夠比較的反映濃度和吸光度的曲線關系，從而進一步比較準確的獲得樣品中待測物質的濃度值。但我們做免疫檢測很少有時候能夠有這么理想的情況，標品濃度和相應OD值往往是"S"型的曲線關系，這時就不能用直線擬合的方式了，而對擬合方法進行選擇就是必要的了。
