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單克隆抗體制備---單克隆抗體的大量生產(chǎn)及鑒定

閱讀:477發(fā)布時(shí)間:2016-12-29

1.單克隆抗體的大量生產(chǎn)

大量生產(chǎn)單克隆抗體的主要方法:

(1)體外使用旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)管大量培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞,從一清液中獲取單克隆抗體。但此方法產(chǎn)量低,一般培養(yǎng)液內(nèi)抗體含量為10~60μg/ml,如果大量生產(chǎn),費(fèi)用較高。

(2)體內(nèi)接種雜交瘤細(xì)胞,制備腹水或血清。

2.單克隆抗體的鑒定

對(duì)制備的McAb進(jìn)行系統(tǒng)的鑒定主要包括以下幾個(gè)方面:

(1)抗體特異性的鑒定

除用免疫原(抗原)進(jìn)行抗體的檢測(cè)外,還應(yīng)該用與其抗原成分相關(guān)的其它抗原進(jìn)行交叉試驗(yàn),方法可用ELISA、IFA法。例如:制備抗黑色素瘤細(xì)胞的McAb,除用黑色素瘤細(xì)胞反應(yīng)外,還應(yīng)該用其它臟器的腫瘤細(xì)胞和正常細(xì)胞進(jìn)行交叉反應(yīng),以便挑選腫瘤特異性或腫瘤相關(guān)抗原的單克隆抗體

(2)McAb的Ig類(lèi)與亞類(lèi)的鑒定

一般在用酶標(biāo)或熒光素標(biāo)記的第二抗體進(jìn)行篩選時(shí)已經(jīng)基本上確定了抗體的Ig類(lèi)型。如果用的是酶標(biāo)或熒光素標(biāo)記的兔抗鼠IgG或IgM,則檢測(cè)出來(lái)的抗體一般是IgG類(lèi)或IgM類(lèi)。至于亞類(lèi)則需要用標(biāo)準(zhǔn)抗亞類(lèi)血清系統(tǒng)作雙擴(kuò)或夾心ELISA來(lái)確定。在作雙擴(kuò)試驗(yàn)時(shí),如加入適量的PEG(3%),更有利于沉淀線的形成。

(3)McAb中和活性的鑒定

用動(dòng)物或細(xì)胞的保護(hù)實(shí)驗(yàn)來(lái)確定McAb的生物學(xué)活性。例如,如果確定抗病毒McAb的中和活性,則可用抗體和病毒同時(shí)接種于易感的動(dòng)物或敏感的細(xì)胞,來(lái)觀察動(dòng)物或細(xì)胞是否得到抗體的保護(hù)。

(4)McAb識(shí)別抗原表位的鑒定

用競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合試驗(yàn),測(cè)相加指數(shù)的方法測(cè)定McAb所識(shí)別抗原位點(diǎn),來(lái)確定McAb的識(shí)別的表位是否相同。

(5)McAb親合力的鑒定

用ELISA或RIA競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合試驗(yàn)來(lái)確定McAb與相應(yīng)抗原結(jié)合的親合力。


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