（一）材料與方法：
（1）生化鑒定：對SS平板與普通葡萄糖培養(yǎng)基生長的可疑菌落進行純培養(yǎng)，然后接種在肝肉湯中培養(yǎng)，置37℃條件下24h后接種于腸桿菌科細菌生化常規(guī)微量鑒定管作生化鑒定。大腸桿菌科細菌生化常規(guī)微量鑒定管由浙江省*后勤部衛(wèi)生防疫檢驗所提供。
（2）分離菌的致病性試驗：將分離菌培養(yǎng)24h后接種3只小白鼠每只腹腔注射0．3ml，另設僅接種肉湯的1只小白鼠作對照，并對死亡小白鼠作第2代接種培養(yǎng)，觀察3d。小白鼠由云南生物制藥廠提供，每只體重16～20g。
（3）分離菌的藥敏試驗：采用藥敏試紙擴散法，即將分離菌的純培養(yǎng)物分別涂抹在SS平板上，靜置5min后貼上藥敏試紙片。置3712培養(yǎng)反應24h，測量藥敏試紙片抑菌圈的直徑并判定其敏感性。藥敏試紙均為浙江省杭州無和微生物試劑有限公司生產(chǎn)。
（5）將該菌接種在SS平板上生長，ss平板有2種菌落，其中較明顯的一種菌落呈深紅色（1號菌落）經(jīng)涂片鏡檢可見大量兩端鈍圓、單獨散在的革蘭氏陰性桿菌，長約2～3ptm，寬為0．6μm左右；另一種菌落呈黃紅色（2號菌落）有相互融合，直徑2-3mm，用鉑金耳挑起菌落則呈長絲狀，經(jīng)涂片染色鏡檢，可見革蘭氏陰性成雙或散在排列大小為0．8～2．01mm×O．3-0．5mm的菌體，取第二代藍頭死亡小白鼠的心血接種于肉湯中培養(yǎng)24h后，將其接種于普通葡萄糖培養(yǎng)基上生長，結果有兩種菌落，1號菌落呈黃色，2號菌落呈乳白色。病原菌的分離：小白鼠（藍頭）接種增菌培養(yǎng)物6h后死亡，其余2只及對照組小白鼠3d后健活。取死亡小白鼠心血涂片，染色鏡檢，可見2種大小不一兩端鈍圓著色較深革蘭氏陰性桿菌。同時將其接種于伊紅美藍瓊脂板上也有兩種菌落，1號產(chǎn)生紫黑色金屬光澤，2號以接種環(huán)挑之易成長絲狀。
（二）結果：
（1） 病原菌的分離：小白鼠（藍頭）接種增菌培養(yǎng)物6h后死亡，其余2只及對照組小白鼠3d后健活。取死亡小白鼠心血涂片，染色鏡檢，可見2種大小不一兩端鈍圓著色較深革蘭氏陰性桿菌。將該菌接種在SS平板上生長，ss平板有2種菌落，其中較明顯的一種菌落呈深紅色（1號菌落）經(jīng)涂片鏡檢可見大量兩端鈍圓、單獨散在的革蘭氏陰性桿菌，長約2～3ptm，寬為0．6μm左右；另一種菌落呈黃紅色（2號菌落）有相互融合，直徑2-3mm，用鉑金耳挑起菌落則呈長絲狀，經(jīng)涂片染色鏡檢，可見革蘭氏陰性成雙或散在排列大小為0．8～2．01mm×O．3-0．5mm的菌體，取第二代藍頭死亡小白鼠的心血接種于肉湯中培養(yǎng)24h后，將其接種于普通葡萄糖培養(yǎng)基上生長，結果有兩種菌落，1號菌落呈黃色，2號菌落呈乳白色。同時將其接種于伊紅美藍瓊脂板上也有兩種菌落，1號產(chǎn)生紫黑色金屬光澤，2號以接種環(huán)挑之易成長絲狀。
（2）藥敏試驗：1號菌對*敏感，對*和*不敏感。2號菌對*、*、*高度敏感，對*中度敏感，對*、*鈉不敏感。
（3）致病力試驗：藍頭小白鼠*代接種6h后死亡，其余2只及對照小白鼠3d后仍健活。藍頭小白鼠第二代接種6h左右又死亡。取死亡小白鼠心血涂片、染色鏡檢及分別培養(yǎng)，又分離出與l、2號菌株生物特性相同的細菌。2號菌株比l號菌株對小白鼠致病力強。
（4）通過對大腸桿菌菌株的血清分型試驗表明，只有致病性大腸桿菌044：K74（L）為陽性，其余均為陰性。
（三）探討：
（1） 大腸桿菌的特點是易形成抗藥性，藥敏試驗結果可以看出曾對大腸桿菌比較敏感的*、*等隨著不斷的應用均產(chǎn)生了不同程度的抗藥性。所以在使用藥物治療大腸桿菌時有條件的應根據(jù)藥敏試驗結果選擇敏感藥物，且注意交替用藥
（2）根據(jù)試驗結果，生化反應對鑒定為大腸桿菌與肺炎克雷伯氏菌有一定臨床意義。與浙江省*后勤部衛(wèi)生防疫檢驗的一致。臨床運用藥物治療及預防進一步證明本傳染病是由肺炎可雷伯氏菌及大腸桿菌混合感染而引起。
（3） 由致病性大腸桿菌與肺炎克雷伯氏菌同時混合感染發(fā)病的豬傳染病尚不太常見，肺炎克雷伯氏菌為條件性病原菌，可能由于氣候的原因，導致豬的抵抗力的下降而致病；豬大腸桿菌病較常見，但多為散發(fā)；這次急性病例的暴發(fā)可能與氣候因素及兩種致病菌同時感染相關。
（4）根據(jù)分離菌的染色特性、形態(tài)、大小及藥敏試驗、毒性試驗、生化反應的鑒定結果，分離菌為致病性大腸桿菌和肺炎克雷伯氏菌。
（5）在培養(yǎng)病料過程中，我們作了肺的需氧和厭氧環(huán)境培養(yǎng)，肝也作了需氧和厭氧培養(yǎng)，而接種小白鼠發(fā)現(xiàn)只有肺的需氧培養(yǎng)液能使小白鼠死亡，而其它不能。說明已鑒定出的兩種菌落在本次試驗中表現(xiàn)為需氧型。
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（4）病原菌的分離：肉眼觀察病料情況，心臟有少量充血點，肺臟有灰白色病灶，肝臟有充血點并質(zhì)地較脆。用燒烙板燒烙后無菌采集病料分別接種于肝肉湯中，置37℃增菌培養(yǎng)24h。取培養(yǎng)液腹腔接種小白鼠3只，每只O．3ml，并作標記紅頭、藍頭和黑頭，同時用肝肉湯接種小白鼠1只作對照，觀察3d。剖解死亡小白鼠無菌取心血分別接種于肝肉湯和 SS培養(yǎng)基、伊紅美藍培養(yǎng)基、普通葡萄糖培養(yǎng)基，37*（2培養(yǎng)24h。取培養(yǎng)液作第二代接種小白鼠3只，每只腹腔注射 O．3ml，同上述方法對死亡小白鼠進行解剖，無菌取心血涂片染色鏡檢，觀察細菌的形態(tài)
