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技術(shù)文章

人C型鈉尿肽ELISA試劑盒實驗原理

閱讀:1742發(fā)布時間:2011-7-20

人C型鈉尿肽ELISA試劑盒自備材料:
1. 蒸餾水。
2. 加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
3. 振蕩器及磁力攪拌器等。

人C型鈉尿肽ELISA試劑盒實驗原理:
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人C型鈉尿肽(CNP)水平。用純化的人C型鈉尿肽(CNP)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入C型鈉尿肽(CNP),再與HRP標(biāo)記的C型鈉尿肽(CNP)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的C型鈉尿肽(CNP)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中人C型鈉尿肽(CNP)濃度。

人C型鈉尿肽ELISA試劑盒樣品收集、處理及保存方法:

1、 血清……操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2、 血漿……EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3、 細(xì)胞上清液……1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4、 組織勻漿……將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液。
5、 保存……如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。


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