現(xiàn)在，研究人員都意識(shí)到基礎(chǔ)研究的重復(fù)性存在問(wèn)題。也許，一部分的責(zé)任在于抗體，這也推動(dòng)了抗體的驗(yàn)證工作。盡管用戶有責(zé)任驗(yàn)證抗體，但制造商同樣有責(zé)任。研究人員介紹了一種驗(yàn)證抗體的目標(biāo)特異性的高通量方法。
雖說(shuō)生物醫(yī)學(xué)研究的重復(fù)性不是太高，但如果說(shuō)低于50%，你也許不相信。在蛋白質(zhì)研究中，研究人員高度依賴于商業(yè)化的抗體。據(jù)統(tǒng)計(jì)，大約95%的抗體用戶依賴預(yù)先制備的抗體。遺憾的是，科學(xué)家并不信賴這些抗體，而廠商的驗(yàn)證通常被認(rèn)為是“不夠，也不可靠的"。因此，他們?cè)谫?gòu)買(mǎi)抗體時(shí)，不僅要花很多錢(qián)，也要花很多的時(shí)間來(lái)挑選。
對(duì)于制造商而言，制備抗體并不是限速步驟。主要的限制在于證明它們能識(shí)別預(yù)定的目標(biāo)，并確定它們的效價(jià)。為了制備出合格的試劑，制造商在高通量的制備之后必須加上高通量的驗(yàn)證。
為了實(shí)現(xiàn)這一點(diǎn)，研究人員利用一種的檢測(cè)來(lái)正確識(shí)別WB中的目的條帶，并驗(yàn)證抗體特異性。這項(xiàng)檢測(cè)包括WB和免疫沉淀（IP）分析，使用了針對(duì)同一目標(biāo)蛋白的不同表位的抗體。他們?cè)O(shè)計(jì)并合成了二到四個(gè)不同的肽段抗原，然后在兔子中制備了針對(duì)不同抗原的抗體，并進(jìn)行純化。之后，他們開(kāi)展了IP和WB分析。每個(gè)抗體被用在獨(dú)立的反應(yīng)中，以便將陽(yáng)性裂解液中內(nèi)源表達(dá)的目標(biāo)蛋白免疫沉淀。隨后在SDS-PAGE膠上分離免疫沉淀物并轉(zhuǎn)印。
在抗體孵育過(guò)程中，他們使用了表位特異性的抗體。通過(guò)遠(yuǎn)端表位抗體識(shí)別出的條帶被認(rèn)為是預(yù)期的目的條帶。一旦目標(biāo)條帶被確定，這些抗體將接受進(jìn)一步的檢測(cè)，以評(píng)估它們?cè)?/span>WB中的性能和特異性。這個(gè)抗體必須識(shí)別特定的目的條帶，并表現(xiàn)出zui小的交叉反應(yīng)性，才算合格。
作者認(rèn)為，用戶和供應(yīng)商都有責(zé)任驗(yàn)證抗體的特異性。在WB/IP的聯(lián)合分析中，利用針對(duì)不同表位的多個(gè)抗體來(lái)驗(yàn)證特異性是一種有效的方法。
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