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目前使用的酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法很多,其中小鼠α2-PIelisa試劑盒按檢測(cè)目的可分為:
間接法——用于測(cè)定抗體
雙抗體夾心法——主要用于測(cè)定大分子抗原
競(jìng)爭(zhēng)抑制法——主要用于測(cè)定小分子抗原
小鼠α2-PIelisa試劑盒的分類:
1.雙抗體夾心法測(cè)抗原
雙抗體夾心法是檢測(cè)抗原zui常用的方法,操作步驟如下:
1)將特異性抗體與固相載體聯(lián)結(jié),形成固相抗體。洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)。
2)加受檢標(biāo)本,保溫反應(yīng)。標(biāo)本中的抗原與固相抗體結(jié)合,形成固相抗原抗體復(fù)合物。洗滌除去其他未結(jié)合物質(zhì)。
3)加酶標(biāo)抗體,保溫反應(yīng)。固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合。*洗滌未結(jié)合的酶標(biāo)抗體。此時(shí)固相載體上帶有的酶量與標(biāo)本中受檢抗原的量相關(guān)。
4)加底物顯色。固相上的酶催化底物成為有色產(chǎn)物。通過(guò)比色,測(cè)知標(biāo)本中抗原的量。
2.雙抗原夾心法測(cè)抗體
反應(yīng)模式與雙抗體夾心法類似。用特異性抗原進(jìn)行包被和制備酶結(jié)合物,以檢測(cè)相應(yīng)的抗體。與間接法測(cè)抗體的不同之處為以酶標(biāo)抗原代替酶標(biāo)抗抗體。此法中受檢標(biāo)本不需稀釋,可直接用于測(cè)定,因此其敏感度相對(duì)高于間接法。乙肝標(biāo)志物中抗HBs的檢測(cè)常采用本法。本法關(guān)鍵在于酶標(biāo)抗原的制備,應(yīng)根據(jù)抗原結(jié)構(gòu)的不同,尋找合適的標(biāo)記方法。
3.間接法測(cè)抗體
間接法是檢測(cè)抗體常用的方法。其原理為利用酶標(biāo)記的抗抗體(抗*抗體)以檢測(cè)與固相抗原結(jié)合的受檢抗體,故稱為間接法。
4.競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗原
小分子抗原或半抗原因缺乏可作夾心法的兩個(gè)以上的位點(diǎn),因此不能用雙抗體夾心法進(jìn)行測(cè)定,可以采用競(jìng)爭(zhēng)法模式。其原理是標(biāo)本中的抗原和一定量的酶標(biāo)抗原競(jìng)爭(zhēng)與固相抗體結(jié)合。標(biāo)本中抗原量含量愈多,結(jié)合在固相上的酶標(biāo)抗原愈少,zui后的顯色也愈淺。小分子激素、藥物等ELISA測(cè)定多用此法。
5.ABS-ELISA法
ABS為親和素(avidin)*(biotin)系統(tǒng)(system)的略語(yǔ)。親和素是一種糖蛋白,分子量60000,每個(gè)分子由4個(gè)能和*結(jié)合的亞基組成。*為小分子化合物,分子量244。用化學(xué)方法制成的衍*-羥基琥珀酰亞胺酯可與蛋白質(zhì)和糖等多種類型的大小分子形成*標(biāo)記產(chǎn)物,標(biāo)記方法頗為簡(jiǎn)便。
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