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培養細胞常用固定劑和固定方法

時間:2011/9/7閱讀:7673
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培養細胞常用固定劑有4%多聚甲醛磷酸緩沖液、丙酮、甲醇和95%乙醇。在固定之前需用37℃預熱的PBS輕洗細胞。

1.4%多聚甲醛磷酸緩沖液 固定10—20分鐘,干燥。

2.甲醇 10‰甲醇固定5—20分鐘,自然干燥。

3.丙酮 4℃冷丙酮固定組織穿透性和脫水性強,抗原保存好,很少用于組織切片,常用于培養細胞和細胞涂片的固定,平時丙酮4℃低溫保存備用,臨用時,將載玻片插入冷丙酮內5~10分鐘,取出后自然于燥。

4.乙醇 95%乙醇脫水性強,易引起組織收縮、變硬,影響切片質量,因而固定時間不宜過長(2小時內)。乙醇使蛋白變性程度輕,固定后蛋白可再溶解,在染色中孵育時間長的情況下,抗原可流失,并減弱反應強度。

5.乙醚(或三氯甲烷) 與乙醇等量混合對組織穿透性*,即使涂片上含較多的黏液,固定效果仍較好,是理想的細胞固定液。

培養細胞固定之后晾干可使細胞牢固地黏附在載玻片上,故對于容易脫落的細胞應延長晾干時間。晾干之后PBS漂洗3次,然后進行組織化學或免疫組織化學染色。

用于免疫組織化學的固定劑種類很多,不同的抗原和標本均可醛類固定液,如效果不佳,再試用其他固定液。選擇*固定液的標準:一是能地保持組織細胞的形態結構;二是zui大限度地保存抗原免疫活性和被檢物不被丟失。一些含重金屬固定液可用于組織化學標本的固定,但在免疫組織化學染色中禁用。

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