人重組人表皮生長因子ELISA試劑盒使用說明書重組人表皮生長因子重組人表皮生長因子重組人表皮生長因子（（（（rh-EGF））））酶聯(lián)免疫酶聯(lián)免疫酶聯(lián)免疫酶聯(lián)免疫分析分析分析分析
　　
　　試劑試劑試劑試劑盒使用說明書盒使用說明書盒使用說明書盒使用說明書
　　
　　本試劑盒僅供研究使用。
　　
　　檢測范圍檢測范圍檢測范圍檢測范圍：：：：96T
　　
　　35ng/L-1200ng/L
　　
　　使用目的使用目的使用目的使用目的：：：：
　　
　　本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中重組人表皮生長因子（rh-EGF）含
　　
　　量。
　　
　　人重組人表皮生長因子ELISA試劑盒使用說明書實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理
　　
　　本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人重組人表皮生長因子（rh-EGF）水平。用純
　　
　　化的人重組人表皮生長因子（rh-EGF）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微
　　
　　孔中依次加入重組人表皮生長因子（rh-EGF），再與HRP標(biāo)記的重組人表皮生長因子
　　
　　（rh-EGF）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。
　　
　　TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的。顏色的深淺和樣
　　
　　品中的重組人表皮生長因子（rh-EGF）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD
　　
　　值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人重組人表皮生長因子（rh-EGF）濃度。
　　
　　人重組人表皮生長因子ELISA試劑盒使用說明書試劑盒組成試劑盒組成試劑盒組成試劑盒組成
　　
　　130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶
　　
　　2酶標(biāo)試劑6ml×1瓶8標(biāo)準(zhǔn)品（2400ng/L）0.5ml×1瓶
　　
　　3酶標(biāo)包被板12孔×8條9標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1瓶
　　
　　4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份
　　
　　5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張
　　
　　6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個(gè)
　　
　　標(biāo)本標(biāo)本標(biāo)本標(biāo)本要求要求要求要求
　　
　　1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能
　　
　　馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
　　
　　2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
　　
　　操作步驟操作步驟操作步驟操作步驟
　　
　　1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀
　　
　　釋。
　　
　　1200ng/L5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150µl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
　　
　　600ng/L4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150µl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
　　
　　300ng/L3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150µl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
　　
　　150ng/L2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150µl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
　　
　　75ng/L1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150µl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
　　
　　2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40µl，
　　
　　然后再加待測樣品10µl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡
　　
　　量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
　　
　　3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
　　
　　4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
　　
　　5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此
　　
　　重復(fù)5次，拍干。
　　
　　6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50µl，空白孔除外。
　　
　　7.溫育：操作同3。
　　
　　8.洗滌：操作同5。
　　
　　9.顯色：每孔先加入顯色劑A50µl，再加入顯色劑B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
　　
　　15分鐘.
　　
　　10.終止：每孔加終止液50µl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)）。
　　
　　11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應(yīng)在加終止
　　
　　液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
　　
　　操作程序總結(jié)操作程序總結(jié)操作程序總結(jié)操作程序總結(jié)：：：：
　　
　　計(jì)算計(jì)算計(jì)算計(jì)算
　　
　　以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的
　　
　　OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，
　　
　　即為樣品的實(shí)際濃度。
　　
　　注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)
　　
　　1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未
　　
　　用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
　　
　　2．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
　　
　　3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間
　　
　　控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
　　
　　4．請(qǐng)每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值
　　
　　大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計(jì)
　　
　　算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
　　
　　5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
　　
　　6．底物請(qǐng)避光保存。
　　
　　7．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
　　
　　8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
　　
　　9．本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
　　
　　保存條件及有效期保存條件及有效期保存條件及有效期保存條件及有效期
　　
　　1．試劑盒保存：；2-8℃。
　　
　　2．有效期：6個(gè)月
　　
　　大鼠載脂蛋白E（Apo-E）ELISA試劑盒
　　
　　大鼠網(wǎng)膜素（omentin）ELISA試劑盒
　　
　　大鼠孤腓肽（OFQ/N）ELISA試劑盒
　　
　　大鼠蛋白磷酸酶（PP）ELISA試劑盒
　　
　　大鼠硫氧還蛋白還原酶（TrxR）ELISA試劑盒
　　
　　大鼠硫氧化還原蛋白（Trx）ELISA試劑盒
　　
　　大鼠膠原酶II（CollagenaseII）ELISA試劑盒
　　
　　大鼠髓系細(xì)胞觸發(fā)受體-1（TREM-1）ELISA試劑盒
　　
　　大鼠膠原酶I（CollagenaseI）ELISA試劑盒