當前位置：上海紀寧實業有限公司>>公司動態>>雙抗體夾心法是檢測抗原方法操作步驟如下
根據同樣原理，將大分子抗原分別制備固相抗原和酶標抗原結合物，ELISA試劑盒即可用雙抗原夾心法測定標本中的抗體。在一步法測定中，應注意鉤狀效應，ELISA試劑盒類同于沉淀反應中抗原過剩的后帶現象。當標本中待測抗原濃度相當高時，過量抗原分別和固相抗體及酶標抗體結合，ELISA試劑盒而不再形成夾心復合物，ELISA試劑盒所得結果將低于實際含量。鉤狀效應嚴重時甚至可出現假陰性結果。
（一）雙抗體夾心法
（1）將特異性抗體與固相載體連接，形成固相抗體：洗滌除去未結合的抗體及雜質。
（2）加受檢標本：ELISA試劑盒使之與固相抗體接觸反應一段時間，讓標本中的抗原與固相載體上的抗體結合，ELISA試劑盒形成固相抗原復合物。洗滌除去其他未結合的物質。
（3）加酶標抗體：ELISA試劑盒使固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結合。ELISA試劑盒*洗滌未結合的酶標抗體。此時固相載體上帶有的酶量與標本中受檢物質的量正相關。
（4）加底物：夾心式復合物中的酶催化底物成為有色產物。ELISA試劑盒根據顏色反應的程度進行該抗原的定性或定量。
（二）雙位點一步法
在雙抗體夾心法測定抗原時，ELISA試劑盒如應用針對抗原分子上兩個不同抗原決定簇的單克隆抗體分別作為固相抗體和酶標抗體，則在測定時可使標本的加入和酶標抗體的加入兩步并作一步（圖15-5）。這種雙位點一步不但簡化了操作，縮短了反應時間，如應用高親和力的單克隆抗體，ELISA試劑盒測定的敏感性和特異性也顯著提高。單克隆抗體的應用使測定抗原的ELISA提高到新水平。
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