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乳酸脫氫酶檢測試劑盒，LDH試劑盒
上海信帆生物為您提供乳酸脫氫酶試劑盒說明書，提供乳酸脫氫酶實驗檢測服務，歡迎大家前來咨詢！
乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase，LDH）幾乎存在于所有組織中，以心、骨骼肌和腎臟豐富，其次為肝、脾、胰腺、腦、肺臟等。采用電泳法可將人組織中的乳酸脫氫酶同工酶分離出5種同工酶區帶，根據其電泳遷移率的快慢，依次為LDH-1、LDH-2、LDH-3、LDH-4、LDH-5。乳酸脫氫酶同工酶分布存在明顯的特異性，可用于心肌疾病的診斷。
乳酸脫氫酶（Lactate Dehydrogenase，LDH）試劑盒說明書
分光光度法
規格：50 管/24 樣
產品內容：
提取液：30mL×1 瓶， 4℃保存；
試劑一：液體 15 mL×1 瓶， 4℃保存；
試劑二：粉劑×1 支，-20℃保存，用時加入 1.3 mL 雙蒸水充分溶解備用，配好后-20 ℃保存，可保存兩周，禁
止反復凍融；
試劑三：液體 15 mL×1 瓶，4℃保存；
試劑四：液體 50 mL×1 瓶，4℃保存；
乳酸脫氫酶檢測試劑盒，LDH試劑盒
產品簡介：
LDH（EC 1.1.1.27）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中，是糖酵解途徑的末端酶，催化丙酮酸與
乳酸之間的可逆反應，伴隨著 NAD+
/NADH 之間互變。
LDH 催化 NAD+氧化乳酸生成丙酮酸，丙酮酸進一步與 2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙，在堿
性溶液中顯棕紅色，顏色深淺與丙酮酸濃度成正比。
試驗中所需的儀器和試劑：
可見分光光度計、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣品測定的準備：
1. 細菌或培養細胞：收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清，按照細菌或細胞數量（10
4個）：提取液體積
（mL）為 500-1000:1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，
功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次），8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
2. 組織：按照組織質量（g）：提取液體積（mL）為 1:5-10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液），
進行冰浴勻漿；8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
3. 血清（漿）樣品：直接檢測。
二、測定操作：
1. 分光光度計預熱 30min 以上，調節波長至 450nm，蒸餾水調零。
2. 樣本測定（在 EP 管中加入下列試劑）
試劑名稱(μL) 測定管 對照管
樣本 50 50
試劑一 250 250
試劑二 50
蒸餾水 50
充分混勻，37℃（哺乳動物）或 25℃（其它物種）水浴 15min
試劑三 250 250
充分混勻，37℃（哺乳動物）或 25℃（其它物種）水浴 15min
試劑四 750 750
充分混勻，室溫靜置 3min，450 nm 下測定吸光度，計算ΔA=A 測定管-A 對照管。每個測定管需要設一個對
照管。
LDH 活力單位計算：
1. 標準條件下測定的回歸曲線， y = 0.725x (x 為標準品濃度，μmol/mL；y 為對吸光度)。
2. 血清（漿）LDH 活力的計算
單位的定義：每 mL 血清（漿）每分鐘催化產生 1nmol 丙酮酸定義為一個酶活力單位。
LDH（U/mL）=ΔA÷0.725÷T×10
3=92×ΔA
3. 細胞、細菌和組織中 LDH 活力的計算
（1） 按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘催化產生 1 nmol 丙酮酸定義為一個酶活力單位。
LDH（U/mg prot）=[ΔA÷0.725×V 1] ÷ (V1×Cpr) ÷T×10
3 =92×ΔA÷Cpr
需要另外測定，建議使用本公司 BCA 蛋白質含量測定試劑盒。
（2） 按樣本鮮重計算：
單位的定義：每 g 組織每分鐘催化產生 1nmol 丙酮酸定義為一個酶活力單位。
LDH（U/g 鮮重）=[ΔA÷0.725×V 1] ÷ (W ×V1÷V2) ÷T×10
3 =92×ΔA÷W
（3） 按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：每 1 萬個細菌或細胞每分鐘催化產生 1nmol 丙酮酸定義為一個酶活力單位。
LDH（U/10
4 cell）= [ΔA÷0.725×V 1]÷(500 ×V1÷V2) ÷T×10
3 =0.184×ΔA÷W
V1：加入反應體系中樣本的體積，0.05 mL；V2：加入提取液的體積，1 mL； T：反應時間，15 min；Cpr：
蛋白質濃度，mg/mL；W：樣品質量，g; 500：細胞或細菌總數，500 萬。
乳酸脫氫酶檢測試劑盒，LDH試劑盒
