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基因組DNA的提取原理及常見問題解析

2019-3-29  閱讀(2590)

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基因組,Genome,一般的定義是單倍體細胞中的全套染色體為一個基因組,或是單倍體細胞中的全部基因為一個基因組。現dai遺傳學家認為,基因是 DNA(脫氧核糖核酸)分子上具有遺傳效應的特定核苷酸序列的總稱,是具有遺傳效應的 DNA 分子片段。基因位于染色體上,并在染色體上呈線性排列。基因不僅可以通過復制把遺傳信息傳遞給下一dai,還可以使遺傳信息得到表達。不同人種之間頭發、膚色、眼睛、鼻子等不同,是基因差異所致。

利用基因,人們可以改良果蔬品種,提高農作物的品質,更多的轉基因植物和動物、食品將問世,人類可能在新世紀里培育出超級物作。

通過控制人體的生化特性,人類將能夠恢復或修復人體細胞和器官的功能,甚至改變人類的進化過程。

產品特點

整個實驗流程不需要昂貴儀器,不需使用酚氯fang等有毒試劑,能夠得到高純度的大片段基因組 DNA,操作簡單,可同時處理多個樣品。

提取得到的基因組 DNA 可用于各種方向的分子生物學實驗,如:文庫構建、基因圖譜、Sunthern-BlottingPCR 等。使用樣品細菌、酵母、血液、動物組織、動物細胞、植物組織、植物細胞等,使用新鮮樣品,或取樣后迅速將樣品密封,放于-20-70保存,注意避免多次凍融樣品,否則將會導致所得基因組 DNA 的片段變小且提取質量下降。

基因組 DNA 提取過程中注意事項:

1、因為 DNA 的一級結構是分子生物研究的基礎,所以應盡量保證 DNA 的完整性。

2、盡量去除多余雜質,如:蛋白、脂類、多糖、有機溶劑等的污染,以確保下游實驗的順利進行。

樣品的預處理方式

植物材料:液氮研磨

動物材料:勻漿、液氮研磨

細菌:溶菌酶破壁

酵母:破壁酶,玻璃珠研磨

基因組提取常見問題

洗滌后硅膠膜上仍有雜質殘留:

細胞裂解不充分, 裂解液和樣品要快速充分混勻。

柱子堵塞:

1.裂解或勻漿處理不*。減少樣品使用量,增加裂解液用量,增加勻漿和裂解時間。

2.處理樣品太多。

洗脫產物 DNA 量很少或沒有:

1.樣品中細胞或病毒濃度低。

2.裂解液和樣品混合不均勻造成的細胞裂解不充分。

3.蛋白酶 K 活性下降造成的細胞裂解不充分。

4.溫浴時間不夠造成的細胞裂解不充分或蛋白降解不*,盡量把組織切成小塊,延長溫浴時間,使裂解物中沒有顆粒狀物質殘留。

5.在上柱前,裂解物中沒加乙醇,或用低濃度乙醇dai替無水乙醇。

6.DNA 沒有有效洗脫。提高洗脫效率,可將離心吸附柱加入洗脫液后在室溫靜置至少 1 min,再離心。

7.洗脫液 pH 不合適,低 pH 值會減少 DNA 產率。確保洗脫液 pH 值在 7.08.5 之間。

8.洗脫體積太大,超過 200μl 洗脫體積所得的 DNA 濃度會降低,但 DNA 總量不會減少。

  • A260/A280 比值較低:

用水作為洗脫液時,比值偏低。

  • A260/A280 比值較高:

大量 RNA 殘留,沒有使用 RNase A,或 RNase A 活性下降。

  • DNA 影響后續酶反應實驗:

1.在洗脫液中有殘留的漂洗液 W1,可通過再次離心去除硅膠膜上的 W1

2.大量 RNA 殘留。

緩沖液 AB 中有白色沉淀:

白色沉淀可能由于低溫或長時間放置產生,可在使用前在 56重新加熱溶解。

操作中加入緩沖液 B 有白色沉淀:

緩沖液 B 加入后產生的白色沉淀在 70溫浴時會消失,不會影響下游操作。

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