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上海信帆為你詳解抗體---單克隆抗體,多克隆抗體,一抗,二抗

2014-2-24  閱讀(4778)

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1.單克隆抗體的優點:
(1)雜交瘤可以在體外“*”地存活并傳代,只要不發生細胞株的基因突變,就可以不斷的生物試劑高特異性、高均一性的抗體。 
(2)可以用相對不純的抗原,獲得大量高度特異的、均一的抗體。 
(3)由于可能得到“無*”的均一性抗體,所以適用于以標記抗體為特點的免疫學分析方法,如IRMA和ELISA等。 
(4)由于單克隆抗體的高特異性和單一生物學功能,可用于體內的放射免疫顯像和免疫導向治療。
2.單克隆抗體的局限性:
(1)單克隆抗體固定的親和性和局限的生物活性限制了它的應用范圍。由于單克隆抗體不能進行沉淀和凝集反應,所以很多檢測方法不能用單克隆抗體完成。
(2)單克隆抗體的反應強度不如多克隆抗體。 
(3)制備技術復雜,而且費時費工,所以單克隆抗體的價格也較高。

一抗和二抗的區別:

(1)初次反應產生抗體:當抗原*次進入機體時,需經一定的潛伏期才能產生抗體,且抗體產生的量也不多,在體內維持的時間也較短。

(2)再次反應產生抗體:當相同抗原第二次進入機體后,開始時,由于原有抗體中的一部分與再次進入的抗原結合,可使原有抗體量略為降低。隨后,抗體效價迅速大量增加,可比初次反應產生的多幾倍到幾十倍,在體內留存的時間亦較長。

(3)回憶反應產生抗體:由抗原刺激機體產生的抗體,經過一定時間后可逐漸消失。此時若再次接觸抗原,可使已消失的抗體快速上升。如再次刺激機體的抗原與初次相同,則稱為特異性回憶反應;若與初次反應不同,則稱為非特異性回憶反應。非特異性回憶反應引起的抗體的上升是暫時性的,短時間內即很快下降。

二抗廣義上是指專門和一抗進行特異性反應和結合的抗體,在免疫學反應中,經常需要針對試驗選擇不同的二抗。檢測任何目的靶蛋白都有不止一種抗體可供選擇,同時在后繼試驗中也會有不同的檢測方案,因此在選擇二抗的時候要綜合考慮一抗的類型及后繼檢測方案的要求,一般來說,選擇合適的二抗需要從下面幾個方面考慮:

【一抗的種屬來源】

二抗應選用與使用的一抗相同的物種來源,例如:如果你的一抗是小鼠源的單克隆抗體,二抗則選抗小鼠的二抗(山羊抗小鼠或者兔抗小鼠等均可);如果一抗是從兔血清里制備的兔源多克隆抗體,則相應的二抗需要選擇抗兔的二抗。即根據一抗的物種來源選擇相應的抗該物種的二抗。

【一抗的類別亞型】

二抗需與一抗的類別或亞類相匹配。這通常是針對單克隆抗體而言。多克隆抗體主要是IgG類免疫球蛋白,因此相應的二抗就是抗IgG抗體。其中單克隆抗體的類別及亞類通常會在產品說明書中都會有描述,如果你的一抗是小鼠IgM,那么相應的二抗就應當是抗小鼠IgM。如果單克隆一抗是小鼠IgG的某一亞類(IgG1,IgG2a,IgG2b,IgG3),那么幾乎所有的抗小鼠IgG都可以與之結合,或者你也可以選擇專門針對這一亞類的二抗,例如,如果你的一抗是小鼠IgG1,那么你可以選擇抗IgG1的二抗,此種抗體在雙標記實驗中尤其適合。在不清楚一抗為何種類/亞類的情況下,可以選用抗相應物種IgG。艾美捷能為您提供通用的IgG(H+L)二抗,或者特異性只結合IgM的Anti IgM (mu) Antibody、IgA的Anti IgA (alpha-Antibody、IgE的Anti IgE (epsilon) Antibody等。

【二抗的種屬來源】

一般來說,不同的種屬來源與二抗的質量沒有必然的,來源于山羊的二抗與來源于驢的二抗在一般的實驗里沒有太多的差別。然而在一些特殊的實驗里, 如雙標實驗里,如果其中一個一抗是山羊來源的,一個是小鼠來源的,則相應的二抗分別要抗山羊和抗小鼠的二抗,這時候,二抗就不能選擇山羊或者小鼠來源的。 

【二抗的耦聯標記】

一般來講,耦聯到二抗上的探針主要有酶(辣根過氧化酶HRP和堿性磷酸酶AP或其衍生物APAAP,PAP),熒光基團(FITC、 Rhodamine、Texas Red、PE、Rhodamine、Dylight等)、生物素、金顆粒。選用哪種探針的二抗主要取決于具體的實驗。對于Western Blot和ELISA,zui常用的二抗是酶標二抗;而細胞或組織標記實驗(細胞免疫化學,組織免疫化學,流式細胞術)中通常使用熒光基團標記的二抗,免疫組化中也可以使用辣根過氧化酶或堿性磷酸酶標記的二抗。如果想要更大程度的放大檢測信號,可以使用Biotin/Avidin檢測系統。在一些熒光檢測方案中,則需要選擇不同的熒光標記;而金顆粒標記的二抗則更多的應用于免疫電鏡中。

【是否經過血清吸附過的二抗】

為減少二抗與樣本的非特異性結合,為您提供不同血清吸附的*二抗。如您的檢測樣本是人源的蛋白,一抗是小鼠源的單克隆抗體,二抗就需要選擇抗小鼠源的二抗,如果您對實驗的特異性要求很高,那我們向您推薦經過人血清吸附過的抗小鼠源的二抗,這種二抗由于經過人血清吸附而排除了與人源組織(如IgG等)可能發生非特異性反應的IgG,因此將非特異性結合降低到zui低。

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