"Anti-Prohibitin??抑制素/腫瘤抑制因子抗體

一抗

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相關(guān)知識(shí)>>>>>

多克隆抗體的制備一般包括以下幾個(gè)步驟：
　　1、制備抗原。 　
　2、選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。
　　3、動(dòng)物免疫。 　
　4、試取血進(jìn)行測(cè)試，看看是否成功免疫。
　　5、如果成功免疫，殺死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，采集全部血清。
　　6、純化出抗體。 　
　7、鑒定抗體。包括純度以及特異性。
　　抗體結(jié)構(gòu)：
　　抗體是具有4條多肽鏈的對(duì)稱結(jié)構(gòu)，其中2條較長、相對(duì)分子量較大的相同的重鏈（H鏈）；2條較短、相對(duì)分子量較小的相同的輕鏈（L鏈）。鏈間由二硫鍵和非共價(jià)鍵聯(lián)結(jié)形成一個(gè)由4條多肽鏈構(gòu)成的單體分子。輕鏈有κ和λ兩種，重鏈有μ、δ、γ、ε和α五種。 整個(gè)抗體分子可分為恒定區(qū)和可變區(qū)兩部分。在給定的物種中，不同抗體分子的恒定區(qū)都具有相同的或幾乎相同的氨基酸序列。可變區(qū)位于""Y""的兩臂末端。在可變區(qū)內(nèi)有一小部分氨基酸殘基變化特別強(qiáng)烈，這些氨基酸的殘基組成和排列順序更易發(fā)生變異區(qū)域稱高變區(qū)。高變區(qū)位于分子表面，zui多由17個(gè)氨基酸殘基構(gòu)成，少則只有2 ～ 3個(gè)。高變區(qū)氨基酸序列決定了該抗體結(jié)合抗原抗原的特異性。一個(gè)抗體分子上的兩個(gè)抗原結(jié)合部位是相同的，位于兩臂末端稱抗原結(jié)合片段（antigen-binding fragment, Fab）。""Y""的柄部稱結(jié)晶片段（crystalline fragment,FC），糖結(jié)合在FC 上。
抗體的效價(jià)鑒定：
不管是用于診斷還是用于治療，制備抗體的目的都是要求較高效價(jià)。不同的抗原制備的抗體，要求的效價(jià)不一。鑒定效價(jià)的方法很多，包括有試管凝集反應(yīng)、瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)等。常用的抗原所制備的抗體一般都有約成的鑒定效價(jià)的方法，以資比較。如制備抗抗體的效價(jià)，一般就采用瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)來鑒定。
單克隆抗體和多克隆抗體有什么區(qū)別?
抗原上那部分可以引起機(jī)體產(chǎn)生抗體的分子結(jié)構(gòu)，叫做抗原決定簇。一個(gè)抗原上可以有好幾個(gè)不同的抗原決定簇，因而使機(jī)體產(chǎn)生好幾種不同的抗體，zui終產(chǎn)生出抗體是漿細(xì)胞。只針對(duì)一個(gè)抗原決定簇起作用的漿細(xì)胞群就是一個(gè)純系，純系的英文為Clone，音譯就是克隆。
由一種克隆產(chǎn)生的特異性抗體叫做單克隆抗體。單克隆抗體能目標(biāo)明確地與單一的特異抗原決定簇結(jié)合，就象導(dǎo)彈精確地命中目標(biāo)一樣。另一方面，即使是同一個(gè)抗原決定簇，在機(jī)體內(nèi)也可以由好幾種克隆來產(chǎn)生抗體，形成好幾種單克隆抗體混雜物，稱為多克隆抗體。
單克隆抗體：
　　（monoclonal antibody，McAb）克隆選擇學(xué)說：淋巴細(xì)胞在與抗原接觸前就已經(jīng)存在多種多樣的與抗原專一性結(jié)合的受體，一種細(xì)胞帶一種受體，進(jìn)入機(jī)體的抗原選擇性的結(jié)合其中的個(gè)別淋巴細(xì)胞，使之活化，增殖產(chǎn)生大量帶有同樣受體的細(xì)胞群，分泌同樣的抗體。當(dāng)抗原進(jìn)入體內(nèi)，在機(jī)體中就會(huì)誘導(dǎo)出針對(duì)不同抗原決定簇的多種抗體，如果要把這些抗體一一分開，用現(xiàn)有的生物化學(xué)或物理化學(xué)方法是根本辦不到的。1975年科勒（Kohler）和米爾斯坦（Milstein）將小鼠免疫細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞融合，培養(yǎng)出既能迅速生長無限繁殖又可分泌特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞。從而獲得針對(duì)某一特殊抗原決定簇的單克隆抗體。1995年，Katherine Knight博士在美國芝加哥Loyola大學(xué)成功地從轉(zhuǎn)基因兔中獲得了骨髓瘤細(xì)胞（Plasmacytoma），開創(chuàng)了兔單克隆抗體技術(shù)。與鼠單抗相比，兔單抗具有：首先，兔抗血清通常含有高親和力抗體，可以比鼠抗血清識(shí)別更多種類的表位；其次，兔單克隆抗體能夠識(shí)別許多在小鼠中不產(chǎn)生免疫的抗原；第三，由于兔脾臟較大，可以更多進(jìn)行的融合試驗(yàn)，使得高通量篩選融合成為可能。
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