免疫組化步驟

1，切片，烤片60℃，1h；

2，脫蠟及復水ELISA試劑盒

二甲苯10min，100％乙醇5min，95％乙醇5min，90％乙醇5min，85％乙醇5min，80％乙醇5min， 75％乙醇5min，60％乙醇5min，50％乙醇5min，30％乙醇5min，自來水1min，雙氧水1min；

3，1份30％H2O2加10份蒸餾水，室溫10min，蒸餾水洗3次，每次3min；

4，微波修復

將切片浸入0.01M枸櫞酸緩沖液，微波中zui大火力（98℃-100℃）加熱至沸騰，冷卻（約5-10min），反復兩次；ELISA試劑盒

5，將切片自然冷卻至室溫，PBS洗滌3次，每次5min；

6，封閉，5％BSA，室溫20min，甩去多余液體；

7，滴加一抗，37℃，1h，或者4℃過夜；

8，PBS洗滌3次，每次3min；

9，滴加二抗，37℃，15-30min；

10，PBS洗滌3次，每次3min；

11，滴加SABC，37℃， 30min；

12，PBS洗滌3次，每次5min；

13，1ml蒸餾水中分別滴加顯色劑，混勻；

14，DAB顯色劑配置好后，滴加于切片，室溫，鏡下檢測反應時間（約5min）；

15，自來水沖洗干凈，過蒸餾水；

16，蘇木素復染2min，自來水沖洗；

17，脫水

30％乙醇3min，50％乙醇3min，70％乙醇3min，80％乙醇3min，90％乙醇3min，95％乙醇3min，100％乙醇3min，二甲苯20min；ELISA試劑盒

18，樹膠封片，鏡檢。