(一)雜交瘤陽性克隆的篩選

    并非所有的雜交瘤細胞都能分泌針對目的抗原的特異性McAb，因此必須通過可靠、簡便、快速的方法進行篩選和克隆化。雜交瘤細胞在融合后2周左右即可篩選，即把分泌所需抗體的雜交瘤孔從眾多的孔中選出來，通常也稱為抗體檢測。具體方法依抗原性質及抗體類型而定。常用的方法有ELISA法、間接血凝試驗、放射免疫測定、直接和間接熒光抗體技術、免疫酶斑點試驗等。

(二)克隆化技術

    為確保McAb的純一性及避免其他陰性細胞對其生長的影響，要將陽性的雜交瘤細胞進行單細胞分離培養，產生單克隆雜交瘤細胞，經反復2～3次檢測均為陽性的雜交瘤細胞，應盡早進行克隆化培養。常用方法包括有限稀釋法(limiting dilution，LD)、軟瓊脂法、直接挑取法及熒光激活細胞分離儀(FACS)分離法。以LD法zui為常用，效果好、簡便。LD法：將細胞再懸浮，收集并計數。按105、104、103、102、101的濃度用RPMI 1640培養液做系列稀釋。取一塊96孔培養板，預先按每孔 lO3～lO6／10ml*培養液加好飼養細胞，然后加入8～10／ml的低濃度細胞懸液，每孔lOOpl，置37℃，5％CO2培養箱內培養7～lOd，其間盡量少觀察。之后，選擇單克隆生長的陽性孔再一次進行克隆。一般需要如此反復3～5次，直至達lOO％陽性iL時即可。

一、雜交瘤細胞的凍存與復蘇

(一)雜交瘤細胞的凍存

    及時凍存原始孔的雜交瘤細胞和每次克隆化得到的亞克隆細胞是十分重要的，因為在沒有建立一個穩定分泌抗體細胞系的時候，細胞的培養過程中隨時可能發生細胞污染、分泌抗體能力喪失等現象。細胞凍存的原理是細胞在加血清和二甲基亞砜的培養基中以一定的緩慢速度下降溫度(O℃～一20℃，下降1℃／min；一20℃～一40℃下降2℃／min)，可在一196℃液氮或液氮蒸氣中長期保存。也可以用細胞凍存裝置進行凍存。每種細胞株至少凍存5～10管。

(二)雜交瘤細胞的復蘇

    將雜交瘤細胞的凍存管從液氮罐里取出，立即投入37℃水浴中，待細胞懸液快速解凍后，立即將細胞用RPMI 1640培養液清洗2次，然后用RPMI 1640*培養液配成細胞懸液滴人24孔培養板或25ml培養瓶中，置37℃，5％CO2培養箱內培養。待細胞生長良好時，2～3d傳代培養。若冷凍后細胞死亡較多，可加入飼養細胞共同培養，在復蘇冷凍細胞前1d，于24孔培養板上每孔加小鼠腹腔巨噬細胞0．5ml(104／ml)。應定期進行復蘇，以檢查雜交瘤細胞的活性和分泌抗體的穩定性，傳代后再凍存。