*代雜交俘獲試驗(hybrid capture test-Ⅰ，HC-Ⅰ)  為克服基因擴增技術的不足，幾年前美國Digene公司開發出一種新的HPV DNA檢測技術——*代雜交俘獲試驗(hybrid capture test-Ⅰ，HC-Ⅰ)。其原理是利用對抗體捕獲信號的放大和化學發光信號的檢測。HC-Ⅰ不需要基因擴增，利用兩套單鏈全長RNA混合探針，可以檢測5種低危型HPV(6, 11, 42, 43, 44)及9種高危型HPV(16, 18, 31, 33, 35, 45, 51, 52, 56 )。理論上檢測靈敏度是 50 000個HPV DNA拷貝。經過臨床試驗評價，HC-Ⅰ檢測靈敏度低于PCR及其他基因擴增技術，但其特異度和陽性預測值卻高于PCR。

    第二代雜交俘獲試驗(hybrid capture test-Ⅱ，HC-Ⅱ)  zui近Digene公司推出的雜交捕獲二代試驗( HC-II )更敏感，由原先的試管法改為96孔平板法，提高了工作效率，降低了成本，更適于大人群的篩查。該法同時能檢測13種高危型HPV (HPV16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59和68型)，已得到世界范圍的認可。Petry等^[8] 對德國8466例患者經HC-Ⅱ檢測，發現HC-Ⅱ檢測宮頸上皮內瘤變(cervical intraepithelial neoplasia，CIN)Ⅱ級的敏感性遠較常規細胞學高，前者是97.8% ，而后者是43.5% ，而且HCⅡ檢測CINⅡ的特異性、陽性預測值和陰性預測值分別為95.3% 、10.9%和100%，與細胞學檢測基本吻合。HC-Ⅱ檢測方法的缺點是不能測定具體的HPV型別。此外，HC-Ⅱ作為雜交反應，存在交叉雜交的問題，即與不在混合探針中的其他HPV型起交叉反應引起假陽性結果而降低特異性^[11]。ELISA試劑盒

   第三代(hybrid capture test-Ⅲ，HC-Ⅲ)  雜交捕獲Ⅲ(HC-Ⅲ)是Digene公司的新一代捕獲雜交法，和HCⅡ一樣也用RNA探針，但用一段帶有生物素的寡核苷酸代替HC-II中的特異性抗體，將RNA DNA雜交體固定在鏈霉素包被的孔中。由于這段寡核苷酸與HPV DNA的另一段序列互補，從而減少了非特異性雜交造成的假陽性結果。而且這種檢測方法能特異性地檢測出靶序列的單個核苷酸的改變，從而使檢測HPV基因型變異體成為可能。HC-Ⅲ也用混合探針，故也不能對HPV進行分型，加上的因素，使這種方法的研究和發展受到一定限制。

   HC Express Array技術：Digene公司在雜交捕獲法的基礎上結合基因芯片推出了HC Express Array技術。這項技術利用芯片上固定的病毒不同亞型的特異性DNA探針，對病毒進行分型判斷，此技術目前用于基因表型分析的研究，且該技術快速分型和定量的特點使其在HPV的分型檢測中具有非常廣闊的應用前景。ELISA試劑盒

    小結：HC操作比較簡單，基本步驟如下：①樣本DNA雙鏈解離為單鏈；②DNA單鏈與全長RNA探針結合為RNA-DNA雜交復合物；③包被在試管壁或微孔壁上的特異性抗體與RNA-DNA雜交復合物結合，使之固定；④結合有多個堿性磷酸酶的第二抗體與RNA-DNA雜交復合物結合，使信號放大；⑤堿性磷酸酶使酶底物發光，分光光度計測量發光強度后與標準值比較，通過堿性磷酸酶的含量確定RNA-DNA雜交復合物的含量。ELISA試劑盒

    但是，HC也有一定的局限性，主要有：①檢測結果陰性并不能排除HPV感染，因為可能存在病毒感染水平很低或者采樣不正確導致的假陰性；②標本采集及保存有特殊的要求，必須應用Digene公司提供的器材及試劑，或者應用液基細胞學剩余標本；③不能區分HPV具體型別；④如果所得相對光單位值接近或者小于1. 0，則不能確定HPV感染。ELISA試劑盒