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醋酸纖維素薄膜電泳

時(shí)間:2012/1/5閱讀:2505
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醋酸纖維素是提纖維素的羥基乙酰化形成的纖維素醋酸酯。由該物質(zhì)制成的薄膜稱為醋酸纖維素薄膜。這種薄膜對(duì)蛋白質(zhì)樣品吸附性小,幾乎能*消除紙電泳中出現(xiàn)的“拖尾”現(xiàn)象,又因?yàn)槟さ挠H水性比較小,它所容納的緩沖液也少,電泳時(shí)電流的大部分由樣品傳導(dǎo),所以分離速度快,電泳時(shí)間短,樣品用量少,5靏的蛋白質(zhì)可得到滿意的分離效果。因此特別適合于病理情況下微量異常蛋白的檢測(cè)。

醋酸纖維素膜經(jīng)過冰醋酸乙醇溶液或其它透明液處理后可使膜透明化有利于對(duì)電泳圖譜的光吸收掃描測(cè)定和膜的長(zhǎng)期保存。

⒈材料與試劑醋酸纖維素膜一般使用市售商品,常用的電泳緩沖液為pH8.6的巴比妥緩沖液,濃度在0.05-0.09mol/L。

⒉操作要點(diǎn)

⑴膜的預(yù)處理:必須于電泳前將膜片浸泡于緩沖液,浸透后,取出膜片并用濾紙吸去多余的緩沖液,不可吸得過干。

⑵加樣:樣品用量依樣品濃度、本身性質(zhì)、染色方法及檢測(cè)方法等因素決定。對(duì)血清蛋白質(zhì)的常規(guī)電泳分析,每cm加樣線不超過1靗,相當(dāng)于60-80靏的蛋白質(zhì)。

⑶電泳:可在室溫下進(jìn)行。電壓為25V/cm,電流為0.4-0.6mA/cm寬。

⑷染色:一般蛋白質(zhì)染色常使用氨基黑和麗春紅,糖蛋白用甲苯胺藍(lán)或過碘酸-Schiff試劑,脂蛋白則用蘇丹黑或品紅亞硫酸染色。

⑸脫色與透明:對(duì)水溶性染料zui普遍應(yīng)用的脫色劑是5%醋酸水溶液。為了長(zhǎng)期保存或進(jìn)行光吸收掃描測(cè)定,可浸入冰醋酸:無水乙醇=30:70(V/V)的透明液中。

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