黃曲霉毒素M1(AFM1)ELISA檢測(cè)試劑盒
一、概要
黃曲霉毒素是一類真菌(如黃曲霉和寄生曲霉)的有毒的代謝產(chǎn)物,它們具有很強(qiáng)的致癌性,主要存在于谷物、堅(jiān)果、棉籽以及一些和人類血液,動(dòng)物飼料相關(guān)的產(chǎn)品中。黃曲霉毒素M1是黃曲霉毒素B1的羥基化代謝產(chǎn)物,也是一種強(qiáng)致癌物質(zhì)。牛乳及其制品是易受到黃曲霉毒素M1污染的食品之一。Aflatoxin M1的檢測(cè)方法有液相色譜法(HPLC),薄層層析法(TLC)等。而使用黃曲霉毒素M1 ELISA試劑盒則能夠快速而準(zhǔn)確的分析樣品中黃曲霉毒素M1殘留。
本試劑盒是應(yīng)用ELISA技術(shù)的新一代真菌毒素檢測(cè)產(chǎn)品,操作時(shí)間短于60min,能zui大限度地減少操作誤差和工作強(qiáng)度。
二、試驗(yàn)原理
本試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法,在酶標(biāo)板微孔條上預(yù)包被黃曲霉毒素M1抗原,樣本中黃曲霉毒素M1和此抗原競(jìng)爭(zhēng)黃曲霉毒素M1抗體,同時(shí)黃曲霉毒素M1抗體與酶標(biāo)二抗相結(jié)合,經(jīng)TMB底物顯色,樣本吸光值與其含有的黃曲霉毒素M1成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較再乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù),即可得出樣品中黃曲霉毒素M1的含量。
黃曲霉毒素M1(AFM1)ELISA檢測(cè)試劑盒
三、適用范圍
可定性、定量檢測(cè)牛乳及其他乳制品等樣本中的黃曲霉毒素M1。
四、使用單位需自備的設(shè)備及試劑
設(shè)備:
┅┅微孔板酶標(biāo)儀450nm/630nm
┅┅振蕩器
┅┅離心機(jī)
┅┅天平:感量0.01g
┅┅微量移液器:?jiǎn)蔚?/span> 20ml~200ml、200ml~1000ml、多道 250ml
┅┅刻度移液管:25ml
┅┅洗耳球
┅┅三角瓶:100ml
┅┅聚苯乙烯離心管:10ml/50ml
試劑:
----去離子水
五、提供的材料與試劑
組份名稱
酶標(biāo)板
高濃度標(biāo)準(zhǔn)品(810ppb)
AFM1酶標(biāo)物
AFM1抗試劑
底物液A液
底物液B液
終止液
濃縮洗滌液(10×)
AFM1濃縮樣品/標(biāo)品稀釋液(4×) 注:試劑盒檢測(cè)范圍0.05ppb~4.05ppb
黃曲霉毒素M1(AFM1)ELISA檢測(cè)試劑盒
六、溶液的配制
七、牛奶、奶粉前處理
八、檢測(cè)步驟
測(cè)定前應(yīng)須知:
1、使用之前將所有試劑和需用板條的溫度回升至室溫(20~25℃)。
2、使用之后立即將所有試劑放回2~8℃。
3、在ELISA分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于洗板的一致性,正確的洗板操作是ELISA測(cè)定程序中的要點(diǎn)。
4、在所有恒溫孵育過程中,避免光線照射,用蓋板膜封住微孔板。
5、黃曲霉毒素M1可致癌,應(yīng)戴手套操作。
九、結(jié)果判定
結(jié)果判定有兩種方法,粗略判定可用第1種方法,而定量判定用第2種方法。注意樣本吸光值與其所含黃曲霉毒素B1成負(fù)相關(guān)。
1、用樣本的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)值比較即可得出其濃度范圍(ppb)。假設(shè)樣本1的吸光度值為0.659,樣本2的吸光度值為1.525,標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值分別是:0ppb為2.101;0.05ppb為1.738;0.15ppb為1.313;0.45ppb為0.831;1.35ppb為0.469;4.05ppb為0.262。則樣本1的濃度范圍是0.45ppb~1.35ppb;樣本2的濃度范圍是0.05ppb~0.15ppb 再乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即可得出樣本中黃曲霉毒素M1的濃度范圍。
2、定量分析
十、檢測(cè)方法靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度
試劑盒檢測(cè)下限:
0.05ppb
回收率:
牛奶:90±15%
奶粉:85±15%
精密度:
試劑盒的變異系數(shù)均小于10%
十一、注意事項(xiàng)
1、室溫低于20℃或試劑及樣本沒有回到室溫(20~25℃)會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。
2、在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會(huì)出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。
3、每加一種試劑前需將其搖勻。
4、反應(yīng)終止液為2M硫酸,避免接觸皮膚。
5、不要使用過了有效日期的試劑盒;也不要使用過了有效期的試劑盒中的任何試劑,摻雜使用過了有效期的試劑盒會(huì)引起靈敏度的降低;不要交換使用不同批號(hào)試劑盒中的試劑。
6、儲(chǔ)存條件
保存試劑盒于2~8℃,不要冷凍,將不用的酶標(biāo)板微孔板放進(jìn)自封袋重新密封。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對(duì)光敏感,因此要避免直接暴露在光線下。
7、試劑變質(zhì)的跡象
發(fā)色試劑有任何顏色表明發(fā)色劑變質(zhì),應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度(450/630nm)值小于0.5(A450nm<0.5)時(shí),表示試劑可能變質(zhì)。
8、在加入底物液A液和底物液B液后,一般顯色時(shí)間為15~20min即可。若顏色較淺,可延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間到30min(或更長(zhǎng))。反之,則減短反應(yīng)時(shí)間。
9、濃縮洗滌液如有結(jié)晶屬正常現(xiàn)象,請(qǐng)加熱溶解后使用。
10、該試劑盒*反應(yīng)溫度為25℃,溫度過高或過低將導(dǎo)致檢測(cè)吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。
十二、貯藏條件及保存期
貯藏條件:保存試劑盒于2~8℃。
保存期:該產(chǎn)品有效期為12個(gè)月。