小麥源性成分探針?lè)晒舛縋CR試劑盒通用原則:

1, 先選擇好探針,然后設(shè)計(jì)引物使其盡可能的靠近于探針。

2, 擴(kuò)增子的長(zhǎng)度應(yīng)不超過(guò)400bp,理想的*能在100-150bp內(nèi),擴(kuò)增片斷約短,有效的擴(kuò)增反應(yīng)就越容易獲得。較短的擴(kuò)增片斷也容易保證分析的一致性

3, 保持GC含量在20%和80%之間,GC富含區(qū)容易產(chǎn)生非特異反應(yīng),從而會(huì)導(dǎo)致擴(kuò)增效率的降低,及在SG分析中非特異信號(hào)。

4, 為了保證效率和重復(fù)性,應(yīng)避免重復(fù)的核苷酸序列,尤其是G(不能有4個(gè)連續(xù)的G)

5, 將引物和探針互相進(jìn)行配對(duì)檢測(cè),以避免二聚體和發(fā)卡結(jié)構(gòu)的形成。

b),探針設(shè)計(jì)指導(dǎo)

1,在設(shè)計(jì)引物之前設(shè)計(jì)探針

2,探針的Tm值應(yīng)在68-70℃之間,如果是目測(cè)探針,則要仔細(xì)審查GC富含區(qū)。

3,探針的5’端要避免有鳥(niǎo)an酸,5’G會(huì)有淬滅作用,即使被切割下來(lái)這種淬滅作用也還會(huì)存在

4,選擇C多于G的鏈作探針,G的含量多于C會(huì)降低反應(yīng)效率,這時(shí)就應(yīng)選擇配對(duì)的另一條鏈作為探針。

6, 探針應(yīng)盡可能的短,不要超過(guò)30個(gè)bp。

7, 檢測(cè)探針的DNA折疊和二級(jí)結(jié)構(gòu)。

MLF, 小鼠淋巴成纖維細(xì)胞

mRTEC, 小鼠腎小管上皮細(xì)胞

CSC, 小鼠心肌細(xì)胞

小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs）

MEF, 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞

MM, 小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞

mCF, 小鼠心臟成纖維細(xì)胞

MN-c, 小鼠皮質(zhì)神經(jīng)元

 細(xì)胞名稱

人絨毛膜毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞

人羊膜上皮細(xì)胞

人絨毛間充質(zhì)成纖維細(xì)胞

人羊膜間充質(zhì)基質(zhì)細(xì)胞

人絨毛膜間充質(zhì)基質(zhì)細(xì)胞

NRK-52E，大鼠腎細(xì)胞

H9c2大鼠心肌細(xì)胞（ATCC來(lái)源）

C2C12, 小鼠肌原細(xì)胞

NIH/3T3, 小鼠成纖維細(xì)胞系

大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs）

HSC-T6, 大鼠肝星狀細(xì)胞系

CHO, 中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞系

COS-7L, 非洲綠猴腎成纖維細(xì)胞

SF9, 昆蟲(chóng)卵巢細(xì)胞

BRL 3A, 大鼠肝正常細(xì)胞

HK-2, 人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細(xì)胞

HET-1A, 人食管上皮細(xì)胞