細胞培養基和器材如何保證無菌及防止污染的過濾藥品

    由于一些微生物，如支原體，病毒等能通過濾膜，所以過濾藥品仍潛在被外源微生物污染的危險，近年來，60Co輻射滅菌技術在醫藥、食品等領域廣泛應用，由于輻射滅菌能夠*殺滅所有微生物。有試驗證實以2Mrad輻射處理的各培養基樣品達到了無菌要求，經多批培養試驗，輻射滅菌安全可靠；輻射滅菌的培養基營養性能不低于過濾組，證明輻射滅菌對培養基性能無不良影響；對血清的輻射滅菌試驗效果也表明60COγ射線不影響培養效果。把干粉培養基經無菌操做定量分裝于滅菌容器內，輻射后以干粉原型貯藏，不但蛋白胨的純凈性得到保障，而且營養性能較過濾后以水溶液形式保存更穩定，對谷氨酰胺等這類水溶液不穩定者特別合適。

    組織細胞培養工作中，可以從以下幾方面來預防支原體的污染：控制環境污染；嚴格實驗操作；細胞培養基和器材要保證無菌；在細胞培養基沖加入適量的抗生素。

　　抗生素主要用于消毒培養液，是培養基過程中預防微生物污染的重要手段，也是微生物污染不嚴重時的“急救”方法。不同抗生素殺滅微生物不同，應根據需要選擇。

　　在細胞培養過程中如果發現破碎的細胞甚多，培養細胞需要頻繁改善營養環境才能支持長期傳代培養時，應該懷疑支原體污染。支原體污染難以觀察特殊的外觀變化，培養液也不渾濁。

　　培養基支原體污染細胞后，特別是重要的細胞株，有必要清除支原體，常用方法有：抗生素處理、抗血清處理、抗生素加抗血清和補體聯合處理。要注意的是：支原體沒有細胞壁，故作用于細胞壁生物合成的抗生素，如內酰胺類、萬古霉素等是不敏感的；對多粘菌素、利福平、磺胺藥物普遍耐火要。對支原體zui有抑制活性抗生素是四環素類、大環內酯類等，氨基糖苷類、氯霉素對支原體有較小的抑制作用。必要時更換所有培養用物。通常，濾過除菌的方法對支原體是沒有作用的。