AMPPD發(fā)光顯色試劑盒操作說明書

AMPPD發(fā)光顯色試劑盒自備材料：
1、轉(zhuǎn)印了蛋白并已以抗體-酶復(fù)合物檢測過的PVDF 膜
2、Tris 鹽緩沖液(TBS)
3、透明的塑料保鮮膜
4、蒸餾水
操作步驟（僅供參考）：
1、臨用前，取適量的A1 和A2，等量混合后獲得Dioxetane Buffer。
2、按 2.5mgAMPPD 溶于25ml Dioxetane Buffer, 配制0.1mg/ml AMPPD 底物溶液即為AMPPD Dioxetane Buffer(發(fā)色發(fā)光顯跡液)，用于膜的染色。
3、取適量Dioxetane Buffer 洗膜兩次，每次15min。
4、對于 PVDF 膜進行的堿性磷酸酶反應(yīng), 膜置于新鮮配制的AMPPD Dioxetane Buffer作用5min。
5、將膜移入適量的AMPPD Dioxetane Buffer 中，浸泡5min(AP 反應(yīng))。
6、取出 PVDF 膜，滴干水分，將膜正面朝下放在一張透明的塑料保鮮膜上，向后折疊將膜包裹起來，成為不漏水的封閉體。
7、在暗房中，將膜正面朝下放在感光膠片上，曝光數(shù)秒至數(shù)小時。
8、如需要，在室溫下以適量的TBS 洗膜15min。
9、將膜放入AMPPD Dioxetane Buffer，條帶應(yīng)在10~30min 內(nèi)出現(xiàn)。
10、用蒸餾水洗膜，終止反應(yīng)。晾干后拍照留*的記錄。
注意事項：
1、PVDF 膜置于膠片上后，不要改變位置。
2、曝光時間應(yīng)根據(jù)實驗情況，自行摸索。
3、配制好的AMPPD Dioxetane Buffer，應(yīng)避光低溫保存。
4、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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