大鼠結腸黏膜上皮細胞

| 商品屬性：

| 細胞介紹：

大鼠結腸黏膜上皮分離自結腸組織；結腸在右髂窩內續于盲腸，在第3骶椎平面連接直腸。結腸分升結腸、橫結腸、降結腸和乙狀結腸4部分，大部分固定于腹后壁，結腸的排列酷似英文字母“M"，將小腸包圍在內。結腸橫切面由內到外依次為：黏膜（上皮層、固有層、黏膜肌層），黏膜下層（疏松結締組織），肌層（內環形、外縱行兩層平滑肌），外膜（纖維膜或漿膜）。腸黏膜上皮細胞是機體內外環境的重要屏障，持續暴露于大量抗原中，也是機體面對病原微生物的道防線。因此，腸黏膜上皮細胞除有吸收、分泌和轉運等重要生理功能之外，在黏膜先天性和獲得性免疫防御機制中也起著重要作用。腸黏膜上皮細胞作為首先接觸抗原的細胞，在黏膜免疫反應的起始階段發揮關鍵作用，它決定黏膜免疫反應的發生、性質和強度。探討正常結腸黏膜上皮細胞的分離、體外培養方法，為研究腸黏膜上皮細胞以及與腸黏膜相關疾病建立合適的細胞模型。

| 方法簡介：

公司實驗室分離的大鼠結腸黏膜上皮采用先機械分離法、后膠原酶消化法并通過上皮細胞專用培養基培養篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

| 質量檢測：

公司實驗室分離的大鼠結腸黏膜上皮經Cytokeratin-18免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

| 培養信息：

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 上皮細胞樣

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

| 細胞培養操作：

1）復蘇細胞：將含有細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培 養過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養基，培養過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養。

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于 37℃培 養箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養 瓶后加少量培養基終止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養液后吹勻。

4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細胞凍存時，棄去培養基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養基終止消化，可使用血球計數板計數。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據細胞數量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

| 注意事項：

1. 收到非紅系有核細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現 象發生請及 時和我們聯系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態、所用培養基、血清比例、所 需細胞因子 等，確保細胞培養條件*。若由于培養條件不*而導致細胞出現問 題，責任由客戶自行承擔。

3. 用 75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題貼壁細胞會有少量 從瓶 壁脫落，將細胞置于培養箱內靜置培養 4~6 小時,再取出觀察。此時多數細胞均 會貼壁，若細胞仍不能貼壁請用臺盼藍 染色測定細胞活力，如果證實細胞活力正常， 請將細胞離心后用新鮮培養基再次貼壁培養；如果染色結果顯示細胞無活 力，請拍下 照片及時和我們聯系，信息確認后我們為您再免費寄送一次。

4. 靜置細胞貼壁后，請將細胞瓶內的培養基倒出，留 6~8mL 維持細胞正常培養，待ATCC CRL-1711(Sf9)細 胞匯 合度  80%左右時正常傳代。

5. 請客戶用相同條件的培養基用于細胞培養。培養瓶內多余的培養基可收集備用，細胞 傳代時可以 一定比例和客戶自備的培養基混合，使細胞逐漸適應培養條件。

6. 建議客戶收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和 技術 部 溝通交流。由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯 系，告知細胞的具體情況，以便我們 的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7.該細胞僅供科研使用。

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