細(xì)胞簡(jiǎn)介：

大鼠腎成纖維分離自腎組織；腎臟是機(jī)體的重要器官，它的基本功能是生成尿液，借以清除體內(nèi)代謝產(chǎn)物及某些廢物、毒物，同時(shí)經(jīng)重吸收功能保留水份及其他有用物質(zhì)，如葡萄糖、蛋白質(zhì)、氨基酸、鈉離子、鉀離子、等，以調(diào)節(jié)水、電解質(zhì)平衡及維護(hù)酸堿平衡。腎臟同時(shí)還有內(nèi)分泌功能，生成腎素、促紅細(xì)胞生成素、活D3、前列腺素、激肽等，又為機(jī)體部分內(nèi)分泌激素的降解場(chǎng)所和腎外激素的靶器官。腎臟的這些功能，保證了機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定，使新陳代謝得以正常進(jìn)行。成纖維細(xì)胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分，由胚胎時(shí)期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來(lái)。成纖維細(xì)胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細(xì)胞功能活動(dòng)旺盛，細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動(dòng)，在一定條件下，它可以實(shí)現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化；成纖維細(xì)胞對(duì)不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損以及骨創(chuàng)傷的修復(fù)有著十分重要的作用。腎成纖維細(xì)胞是腎臟結(jié)締組織中重要的細(xì)胞類(lèi)型，在體外培養(yǎng)中，一般大致成梭形、多角形或不規(guī)則形等，為貼壁生長(zhǎng)型細(xì)胞。剛分離的腎成纖維細(xì)胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁，其中部分開(kāi)始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細(xì)胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長(zhǎng)，不聚集成團(tuán)；細(xì)胞生長(zhǎng)迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細(xì)胞排列緊密，有的交叉重疊生長(zhǎng)，平坦、胞體較大，細(xì)胞質(zhì)透明，細(xì)胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細(xì)胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。其主要功能有：①組成過(guò)濾屏障內(nèi)壁的重要部分；②在炎癥和致血栓物質(zhì)的刺激合成必要的生物活性分子；③受損后影響系膜細(xì)胞和上皮細(xì)胞，進(jìn)而影響腎臟病變。

方法簡(jiǎn)介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠腎成纖維采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠腎成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣

傳代特性 可傳5代左右；3代以?xún)?nèi)狀態(tài)佳

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

細(xì)胞傳代步驟：

如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

細(xì)胞復(fù)蘇步驟:

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

細(xì)胞凍存步驟:

待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例； 
1．細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，細(xì)胞變圓脫落后，加入2ml培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。 
2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。
3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
公司正在出售的產(chǎn)品：

人組織因子途徑抑制物(TFPI)ELISA 試劑盒

Rat apolipoprotein B100 (apo-B100) ELISA Kit 大鼠載脂蛋白B100(apo-B100)試劑盒

Humanai-hepatitisDvirusaibody,ai-HDVELISAKit 人抗丁型肝病毒抗體(ai-HDV)試劑盒 進(jìn)口分裝

HumanHeatShockProtein60,HSP-60試劑盒人熱休克蛋白60(Hsp-60)試劑盒

組織副氏菌A(SalmonellaParatyphiA)定量PCR擴(kuò)增試劑盒20次

HumanMaixmetalloproteinase3,MMP-3ELISAKit人基質(zhì)金屬蛋白酶3(MMP-3)試劑盒

植物激素脫落酸（ABA）ELISAKit   ELISA. 

植物K1(VK1)ELISAKit   ELISA. 

植物B12(VB12)ELISAKit   ELISA. 

植物A(VA)ELISAKit   ELISA.

白介素21受體抗體

植物纖維素酶(CE)試劑盒

Human ai calmodulin specific aibody (CAM-ab) ELISA Kit 人抗鈣調(diào)素特異抗體(CAM-ab)試劑盒

Porcineendothelin1,ET-1ELISAKit 豬內(nèi)皮素1(ET-1)試劑盒 進(jìn)口分裝

CLIAKitforAFP-L3ELISAKit小鼠小扁結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體3

血液A含量比色法定量試劑盒20次

Mousethyroidstimulatinghormonereceptoraidoby,AbELISAKit小鼠抗促甲狀腺素受體抗體(Ab)試劑盒

卵泡刺激素結(jié)合蛋白1抗體

ERBB3重組人 HER3 / ErbB3 蛋白  Protein

三葉因子1(TFF1)重組蛋白 Recombinant Trefoil Factor 1 (TFF1)

DHRS9重組人 DHRS9 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

ADH7 Protein Human 重組人 CAMK2A / CAMKA 蛋白 (GST 標(biāo)簽)

HA Protein H5N1 重組甲型流感 H5N1 (A/VietNam/1203/2004) 血凝素HA2 (Hemagglutinin) 蛋白

大鼠腎成纖維細(xì)胞三葉因子1(TFF1)重組蛋白 Recombinant Trefoil Factor 1 (TFF1)

ADH7 Protein Human 重組人 CAMK2A / CAMKA 蛋白 (GST 標(biāo)簽)

ERBB3重組人 HER3 / ErbB3 蛋白  Protein

HA Protein H5N1 重組甲型流感 H5N1 (A/VietNam/1203/2004) 血凝素HA2 (Hemagglutinin) 蛋白

DHRS9重組人 DHRS9 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein