細胞傳代步驟：

如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

細胞簡介：

大鼠食管平滑肌分離自食管組織；食管可分為頸段、胸段和腹段，脊椎動物食管的頸段位于氣管背后和脊柱前端，胸段位于左、右肺之間的縱膈內，胸段通過膈孔與腹腔內腹相連，腹段很短與胃相連。哺乳動物的食管結構上由內向外分四層：黏膜層、黏膜下層、肌層和外膜。其中，肌層上1/3段為骨骼肌，下1/3為平滑肌，中段為骨骼肌和平滑肌混合組成。其中，肌纖維的排列方式分為內環形和外縱形兩層。食管的蠕動是由食管平滑肌收縮嚴格控制，食管還有括約肌，位于環狀軟骨水平的，稱為食管上括約?。晃挥谑彻芟露?，一部分在膈上，穿過膈孔，另一部分在膈下的高壓帶，稱為食管下括約肌。食管平滑肌細胞原代分離培養3天后，可見細胞貼壁伸展，細胞形態大小不一，呈梭形、不規則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細胞匯合，多數細胞伸展呈長梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細胞平行排列成單層或部分區域多層重疊生長，高低起伏；細胞密度低時，常交織成網狀；密度高時，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細胞生長較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態學特征和生長特點。

方法簡介：

公司實驗室分離的大鼠食管平滑肌采用-膠原酶聯合消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測：

公司實驗室分離的大鼠食管平滑肌經α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養信息：

培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳5代左右；3代以內狀態佳

消化液 0.25%

培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

細胞復蘇步驟:

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

公司正在出售的產品：

大鼠封閉蛋白3(CLDN3)試劑盒 ，英文名： CLDN3 ELISA Kit

Rat beta endorphin (beta -EP) ELISA Kit 大鼠β內啡肽(β-EP)試劑盒

Ratsolublereceptoractivatorofnuclearfactor-kBligand,sRANKLELISAKit 大鼠可溶性核因子κB受體活化因子配基(sRANKL)試劑盒 進口分裝

CLIAKitforDR-70TM(HumaumormarkerDR-70forlungcancer)ELISAKit人肺癌標志物DR-70

細胞皮爾斯(PERLS-DAB)非血紅素鐵(三價)強化染色試劑盒

RatHighdensitylipoprotein,HDLELISAKit大鼠高密度脂蛋白(HDL)試劑盒

載脂蛋白E   英文名稱：   apolipoprotein/apoprotein E   英文縮寫：   APOE

載脂蛋白P   英文名稱：   Apolipoprotein P   英文縮寫：   ApoP

血管生成素相關生長因子   英文名稱：   Angiopoietin Growth Factors   英文縮寫：   AGF

血管生成素-2   英文名稱：   Angiopoietin-2   英文縮寫：   ANG2

NT5DC2蛋白抗體

植物赤(GA)ELISA 試劑盒

Human ai cyclic ciullinated peptide aibody (CCP) ELISA Kit 人抗環胍肽抗體(CCP)試劑盒

PorcineCompleme3,C3ELISAKit 豬補體蛋白3(C3)試劑盒 進口分裝

ADVIgMVII腺病毒IgMⅦ型(間接法二步法)

血液(NO)活性熒光定量試劑盒50次

MouseSolubleprotein-100,S-100ELISAKit小鼠S100蛋白(S-100)試劑盒

GADD45G抗體

ASAH2重組小鼠 ASAH2 蛋白 (His 標簽) Protein

Cholesterol 膽 100gCholesterol 膽

PAK3重組人 PAK3 蛋白 (His 標簽) Protein

ACO1 Protein Human 重組人 ACO1 / irp1 蛋白 (His 標簽)

KIRREL Protein Mouse 重組小鼠 KIRREL1 / NEPH1 蛋白 (His 標簽)

大鼠食管平滑肌細胞Cholesterol 膽 100gCholesterol 膽

ACO1 Protein Human 重組人 ACO1 / irp1 蛋白 (His 標簽)

ASAH2重組小鼠 ASAH2 蛋白 (His 標簽) Protein

KIRREL Protein Mouse 重組小鼠 KIRREL1 / NEPH1 蛋白 (His 標簽)

PAK3重組人 PAK3 蛋白 (His 標簽) Protein

細胞凍存步驟:

待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例； 
1．細胞凍存時，棄去培養基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，細胞變圓脫落后，加入2ml培養基終止消化，可使用血球計數板計數。 
2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。
3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。