細胞傳代步驟：

如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

細胞簡介：

人胃癌組織源成纖維分離自患有胃癌病人的胃癌組織；胃癌（gastric carcinoma）是起源于胃黏膜上皮的惡性腫瘤，在我國各種惡性腫瘤中發(fā)病率居，胃癌可發(fā)生于胃的任何部位，其中半數(shù)以上發(fā)生于胃竇部，胃大彎、胃小彎及前后壁均可受累，絕大多數(shù)胃癌屬于腺癌。在胃癌侵襲和轉(zhuǎn)移的過程中，涉及諸多復雜的過程，如細胞外基質(zhì)的硬化和降解、新生血管的形成等，而這些過程會直接或間接的引起腫瘤微環(huán)境（Tumor mircoenvironment）的改變。腫瘤微環(huán)境即腫瘤細胞生存的外部環(huán)境，由不同種類的非腫瘤性的細胞與細胞外基質(zhì)（Extracellular matrix，ECM）構成，包括纖維細胞，免疫細胞，內(nèi)皮細胞，間充質(zhì)干細胞等，腫瘤細胞通過調(diào)控這些間質(zhì)細胞，創(chuàng)造出有利于自身侵襲轉(zhuǎn)移的條件，從而使得腫瘤得到進展。越來越多的證據(jù)表明，腫瘤微環(huán)境的改變在腫瘤進展中扮演著重要的角色。在腫瘤微環(huán)境中，研究多也是主要的間質(zhì)細胞是腫瘤相關成纖維細胞（cancer-associated fibroblasts, CAFs）。CAFs 主要由腫瘤周邊的正常成纖維細胞和成纖維細胞樣細胞演化而來。胃癌組織源成纖維細胞多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構，其細胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。剛分離的胃癌組織源成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質(zhì)透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。

方法簡介：

公司實驗室分離的人胃癌組織成纖維采用混合膠原酶消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測：

公司實驗室分離的人胃癌組織成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

細胞復蘇步驟:

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

公司正在出售的產(chǎn)品：

小鼠神經(jīng)生長導向因子(Slit2) ELISA 試劑盒

Mueller tube inhibitory substance / ai Mueller tube hormone (MIS/AMH) ELISA Kit 人繆勒管抑制物質(zhì)/抗繆勒管激素(MIS/AMH)試劑盒

HumanN-Acetyl-Ser-Asp-Lys-Pro,AcSDKPELISAKit 人N-乙酰基-絲氨酰-天門冬酰-賴氨酰-脯(AcSDKP)試劑盒 96T/48T 進口分裝

GoatBeta-Endorphin,β-EP試劑盒山羊β內(nèi)啡肽(β-EP)試劑盒規(guī)格：96T/48T

真菌/酵母黑色素含量比色法定量試劑盒20次

MouseCollageypeⅡ,ColⅡELISAKit小鼠Ⅱ型膠原(ColⅡ)試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠髓過氧化物酶   英文名稱：   Mouse Myeloperoxidase   英文縮寫：   MPO

小鼠巨噬細胞趨化蛋白-1   英文名稱：   monocyte chemotactic protein 1   英文縮寫：   MCP-1

小鼠巨噬細胞趨化蛋白-3   英文名稱：   monocyte chemotactic protein 3   英文縮寫：   MCP-3

小鼠M-能受體結合力   英文名稱：   M—cholinoceptor binding capacity   英文縮寫：   MCBC

脂肪酸合成酶單克隆抗體

小鼠糖蛋白130(gp130)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat leinizing hormone releasing hormone (LHRH) ELISA Kit 大鼠黃體生成素釋放激素(LHRH)試劑盒

HumanCytochromeP450c21/21-hydroxylase,CYP21AELISAKit 人細胞色素P450c21A/21-羥化酶(CYP21A)試劑盒 96T/48T 進口分裝

cit瓜規(guī)格：96T/48T

載玻片細胞鈣ATP酶PMCA蛋白表達熒光顯微鏡試劑盒10/20次

Mouseeosinophilcationicprotein,ECPELISAKit小鼠嗜酸性粒細胞陽離子蛋白(ECP)試劑盒規(guī)格：96T/48T

VAC14蛋白抗體

WFDC2重組狗 WAP5 / WFDC2 / HE4 蛋白 (Fc 標簽) Protein

OAT-1 (Organic anion transporter 1 0.5mgOAT-1 (Organic anion transporter 1)human 陰離子轉(zhuǎn)運蛋白-1(人源)

TRIB2重組人 TRIB2 / TRB2 蛋白 Protein

CHN1 Protein Human 重組人 CHN1 / Chimerin 1 蛋白

CHL1 Protein Mouse 重組小鼠 CHL-1 蛋白

人胃癌組織成纖維細胞OAT-1 (Organic anion transporter 1 0.5mgOAT-1 (Organic anion transporter 1)human 陰離子轉(zhuǎn)運蛋白-1(人源)

CHN1 Protein Human 重組人 CHN1 / Chimerin 1 蛋白

WFDC2重組狗 WAP5 / WFDC2 / HE4 蛋白 (Fc 標簽) Protein

CHL1 Protein Mouse 重組小鼠 CHL-1 蛋白

TRIB2重組人 TRIB2 / TRB2 蛋白 Protein

細胞凍存步驟:

待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例； 
1．細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，細胞變圓脫落后，加入2ml培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。 
2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。
3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。