細胞簡介：

人椎間盤纖維環分離自椎間盤組織；椎間盤是位于脊柱兩椎體之間，由軟骨板、纖維環、髓核組成的一個密封體。上下有軟骨板，是透明軟骨復蓋于椎體上，下面骺環中間的骨面。上下的軟骨板與纖維環一起將髓核密封起來。纖維環由膠原纖維束的纖維軟骨構成，位于髓核的四周。纖維環的纖維束相互斜行交叉重疊，使纖維環成為堅實的組織，能承受較大的彎曲和扭轉負荷。纖維環的前側及兩側較厚，而后側較薄。纖維環的前部有強大的前縱韌帶，后側的后縱韌帶較窄、較薄。纖維環細胞密度為9000個細胞/mm3，其外層的細胞呈梭型，主要屬于纖維細胞，內層細胞呈圓形，主要屬于軟骨細胞。在培養的情況下，用透射電鏡觀察則有許多共同的超微結構表現，它們的核較圓，核仁較明顯。細胞質內可見大量的附有核糖體顆粒的粗面內質網和滑面內質網。細胞質內線粒體多，為橢圓形，有的可看到雙層單位膜，由單位膜包繞初級深酶體和次級深酶體。細胞質內有一系列的扁平囊及小泡主成的高爾基復合體和分泌顆粒，纖維環細胞合成分泌蛋白多糖及膠原纖維的能力很旺盛，保證纖維環生理代謝活動所需的構造物質的供給。一但這種供給減少，纖維環的生物性能就會減弱，椎間盤開始退變。

方法簡介：

公司實驗室分離的人椎間盤纖維環采用膠原酶-聯合消化法并結合軟骨細胞專用培養基培養篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測：

公司實驗室分離的人椎間盤纖維環經Ⅰ型膠原蛋白免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養信息：

培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 梭形、多角形

傳代特性 可傳5代左右；3代以內狀態佳

消化液 0.25%

培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

細胞傳代步驟：

如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

細胞復蘇步驟:

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

細胞凍存步驟:

待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例； 
1．細胞凍存時，棄去培養基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，細胞變圓脫落后，加入2ml培養基終止消化，可使用血球計數板計數。 
2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。
3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
公司正在出售的產品：

大鼠肌球蛋白輕鏈激酶(MYLK)試劑盒 ，英文名： MYLK ELISA Kit

Mouse tissue factor pathway inhibitor (TFPI) ELISA Kit 小鼠組織因子途徑抑制物(TFPI)試劑盒

RatPeosidineELISAKit 大鼠戊糖素(Peosidine)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforFIIELISAKit大鼠Ⅱ

細胞可溶性總核蛋白制備試劑盒20次

Ratmaixmetalloproteinase7,MMP-7ELISAKit大鼠基質金屬蛋白酶7(MMP-7)試劑盒規格：96T/48T

小鼠葡萄糖氧化酶(GOD)試劑盒   96T/48T

小鼠葡萄糖激酶(GCK)試劑盒   96T/48T

小鼠破骨細胞分化因子(ODF)試劑盒   96T/48T

小鼠皮質/上腺(CO)試劑盒   96T/48T

Dapper2蛋白抗體

小鼠神經激肽B(NKB)ELISA 試劑盒 96T/48T

Annexin V (ANX- V) ELISA Kit 人膜聯蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)試劑盒

HumanPlaceaCadherin,P-cadELISAKit 人P鈣黏蛋白/胎盤鈣黏蛋白(P-cad)試劑盒 96T/48T 進口分裝

GoatIerleukin10,IL-10試劑盒山羊白介素10(IL-10)試劑盒規格：96T/48T

真菌/酵母菌ATP生物發光法定量試劑盒50次

MousecoagulationfactorⅧrelatedaigen,FⅧ-AgELISAKit小鼠Ⅷ相關抗原(FⅧ-Ag)試劑盒規格：96T/48T

神經元，肌肉特異性烯醇化酶抗體

TF重組野豬 Transferrin / TF 蛋白 Protein

OLFM1 peptide 嗅球蛋白1多肽抗原 0.5mlOLFM1 peptide 嗅球蛋白1多肽抗原

TNFRSF10A重組人 TRAIL R1 / CD261 / TNFRSF10A 蛋白 Protein

COL5A2 Protein Human 重組人 COL5A2 蛋白 (Fc 標簽)

MMP8 Protein Mouse 重組小鼠 MMP8 / CLG1 蛋白

人椎間盤纖維環細胞OLFM1 peptide 嗅球蛋白1多肽抗原 0.5mlOLFM1 peptide 嗅球蛋白1多肽抗原

COL5A2 Protein Human 重組人 COL5A2 蛋白 (Fc 標簽)

TF重組野豬 Transferrin / TF 蛋白 Protein

MMP8 Protein Mouse 重組小鼠 MMP8 / CLG1 蛋白

TNFRSF10A重組人 TRAIL R1 / CD261 / TNFRSF10A 蛋白 Protein