細(xì)胞傳代步驟：

如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

細(xì)胞簡介：

人子宮頸上皮分離自子宮頸組織；子宮頸位于子宮下部，近似圓錐體，上端與子宮體相連，下端深入陰道。陰道頂端的穹隆又將子宮頸分為兩部分：宮頸突入陰道的部分稱宮頸陰道部，在陰道穹隆以上的部分稱宮頸陰道上部。宮頸的中央為前后略扁的長梭性管腔，其上端通過宮頸內(nèi)口與子宮腔相連，其下端通過宮頸外口開口于陰道。內(nèi)外口之間即宮頸管。宮頸的大小與宮體比例隨年齡及內(nèi)分泌狀態(tài)等而變化；宮頸壁由黏膜、肌層和外膜組成。子宮頸可有多種疾病，包括胚胎發(fā)育異常、炎癥、瘤樣病變、良性腫瘤、惡性腫瘤、損傷、宮頸性不孕、輔助生育技術(shù)、宮頸與性、宮頸妊娠等許多問題，體外培養(yǎng)的子宮頸上皮細(xì)胞對于研究其生理功能、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義。

方法簡介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的人子宮頸上皮采用膠原酶消化法，結(jié)合上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的人子宮頸上皮經(jīng)Cytokeratin-19免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

細(xì)胞復(fù)蘇步驟:

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠β-防御素(β-DF)試劑盒 ，英文名： β-DF ELISA Kit

Mouse thyroid stimulating hormone (TSH) ELISA Kit 小鼠促甲狀腺素(TSH)試劑盒

ELISA 小鼠骨橋素(mouse OPN)  進(jìn)口分裝

CLIAKitforIL-10(HumanIerleukin10)ELISAKIT人白介素10

通用型美洲型豬繁殖和呼吸障礙綜合征/藍(lán)耳病(PorcineReproductiveandRespiratorySyndrome;PRRS)試劑盒20次

ELISAKitVEGF-D大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子D

小鼠牛小腸堿性0酸酶(CIAP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠α半乳糖基抗原(α-Gal)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠β基己糖苷酶A(β-HexA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A(SP-A)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

S100鈣結(jié)合蛋白P抗體

小鼠三腺原酸(T3)試劑盒 96T/48T

People in morphine peptide -2 (EM-2) ELISA Kit 人內(nèi)嗎非肽-2(EM-2)試劑盒

Humanβamyloidprecursorprotein,βAPPELISAKit 人淀粉樣前體蛋白(βAPP)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

GuineaPigadvancedglycationendproducts,AGEs試劑盒豚鼠晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)試劑盒規(guī)格：96T/48T

真菌/酵母0脂酶D1(PhospholipaseD1)活性熒光定量試劑盒20次

Mousec-junELISAKit小鼠c-jun試劑盒規(guī)格：96T/48T

c氧化酶IV亞型1抗體

IL13重組食蟹猴 IL13 / ALRH 蛋白 Protein

myelin P0 prothein( peripheral myelin prothein Zero;MPZ;MPP 0.5mgmyelin P0 prothein( peripheral myelin prothein Zero;MPZ;MPP) 外周髓鞘蛋白0(P0蛋白)多肽抗原

C1QBP重組人 HABP1 / C1QBP / GC1QBP 蛋白 Protein

COMMD8 Protein Human 重組人 COMMD8 蛋白

HAVCR2 Protein Mouse 重組小鼠 TIM-3 / HAVCR2 蛋白

人子宮頸上皮細(xì)胞myelin P0 prothein( peripheral myelin prothein Zero;MPZ;MPP 0.5mgmyelin P0 prothein( peripheral myelin prothein Zero;MPZ;MPP) 外周髓鞘蛋白0(P0蛋白)多肽抗原

COMMD8 Protein Human 重組人 COMMD8 蛋白

IL13重組食蟹猴 IL13 / ALRH 蛋白 Protein

HAVCR2 Protein Mouse 重組小鼠 TIM-3 / HAVCR2 蛋白

C1QBP重組人 HABP1 / C1QBP / GC1QBP 蛋白 Protein

細(xì)胞凍存步驟:

待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例； 
1．細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，細(xì)胞變圓脫落后，加入2ml培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。 
2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。
3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。