細胞傳代步驟：

如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

細胞簡介：

兔冠狀動脈成纖維分離自冠狀動脈組織；冠狀動脈是供給心臟血液的動脈，起于主動脈根部，分左右兩支，行于心臟表面。采用Schlesinger等的分類原則，將冠狀動脈的分布分為三型：右優勢型、均衡型、左優勢型。左右冠狀動脈是升主動脈的第一對分支。左冠狀動脈為一短干，發自左主動脈竇，經肺動脈起始部和左心耳之間，沿冠狀溝向左前方行后，立即分為前室間支和旋支。前室間支沿前室間溝下行，旋支繞過心尖切跡至心的膈面與右冠狀動脈的后室間支相吻合。它是構成冠狀動脈壁的主要細胞成分，細胞膜上分布著多種離子通道，如電壓依賴性Na+通道、多種Ca2+通道和K+通道；它們參與了靜息電位的維持與細胞膜電位的復極化、超極化，調節血管平滑肌的收縮及舒張功能，此外動脈粥樣硬化的發展也涉及冠狀動脈平滑肌細胞增殖、炎癥及凋亡等。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質嗜弱堿性，具明顯的蛋白質合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現跟纖維細胞的互相轉化；成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。剛分離的肺成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養基中。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現為小的突起；6h后細胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。

方法簡介：

實驗室分離的兔冠狀動脈成纖維采用-膠原酶聯合消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測：

實驗室分離的兔冠狀動脈成纖維經Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養信息：

培養基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態：成纖維細胞樣

傳代特性：可傳2-3代左右；2代以內狀態佳

消化液：0.25%

培養條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

兔冠狀動脈成纖維體外培養周期有限；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養，以此保證該細胞的佳培養狀態。

細胞復蘇步驟:

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

公司正在出售的產品：

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人載脂蛋白E試劑盒   人載脂蛋白E試劑盒   規格型號：96T/48T   人載脂蛋白E試劑盒，規格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝），產品別名：人載脂蛋白E試劑盒、人載脂蛋白E 試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

人載脂蛋白C3試劑盒   人載脂蛋白C3試劑盒   規格型號：96T/48T   人載脂蛋白C3試劑盒，規格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝），產品別名：人載脂蛋白C3試劑盒、人載脂蛋白C3 試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

人載脂蛋白B100試劑盒   人載脂蛋白B100試劑盒   規格型號：96T/48T   人載脂蛋白B100試劑盒，規格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝），產品別名：人載脂蛋白B100試劑盒、人載脂蛋白B100 試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

人載脂蛋白A5試劑盒   人載脂蛋白A5試劑盒   規格型號：96T/48T   人載脂蛋白A5試劑盒，規格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝），產品別名：人載脂蛋白A5試劑盒、人載脂蛋白A5 試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

泛肌動蛋白重組兔單抗

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溶質載體家族22成員10抗體

ACVR2A重組小鼠 ACVR2A / ActrIIa 蛋白 (His & Fc 標簽) Protein

Beta-Amyloid(1-28 0.5mgBeta-Amyloid(1-28) β淀粉樣肽1-28(多肽蛋白)

NRG1重組人 NRG1-alpha 蛋白 (EGF Domain, Fc 標簽) Protein

ITGAX & ITGB2 Protein Human 重組人 ITGAX & ITGB2 Heterodimer 蛋白

FZD4 Protein Rat 重組大鼠 Frizzled-4 / FZD4 蛋白 (Fc 標簽)

兔冠狀動脈成纖維細胞Beta-Amyloid(1-28 0.5mgBeta-Amyloid(1-28) β淀粉樣肽1-28(多肽蛋白)

ITGAX & ITGB2 Protein Human 重組人 ITGAX & ITGB2 Heterodimer 蛋白

ACVR2A重組小鼠 ACVR2A / ActrIIa 蛋白 (His & Fc 標簽) Protein

FZD4 Protein Rat 重組大鼠 Frizzled-4 / FZD4 蛋白 (Fc 標簽)

NRG1重組人 NRG1-alpha 蛋白 (EGF Domain, Fc 標簽) Protein

細胞凍存步驟:

待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例； 
1．細胞凍存時，棄去培養基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，細胞變圓脫落后，加入2ml培養基終止消化，可使用血球計數板計數。 
2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。
3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取