ICA人胰島細胞抗體ELISA試劑盒

C-Peptide人C肽酶聯免疫    REG-4人再生基因蛋白IV酶聯免疫
HCG人絨毛膜促性腺激素酶聯免疫    RCOR3人REST協阻抑因子3酶聯免疫
β-CG人絨毛膜促性腺激素β酶聯免疫    RCA蓖麻凝集素酶聯免疫 
LH人促黃體激素酶聯免疫    RBP人視黃醇結合蛋白酶聯免疫 
ICA人胰島細胞抗體ELISA試劑盒 途：
用GsaR人促胃液素受體ELISA試劑盒的含量。

PS人潑尼松龍酶聯免疫     RBP大鼠視黃醇結合蛋白酶聯免疫
LEP人瘦素酶聯免疫    RBP-4小鼠視黃醇結合蛋白4酶聯免疫 
LR/Ob-R人苗條素受體酶聯免疫    RBP-4兔子視黃醇結合蛋白4酶聯免疫
HGH人生長激素酶聯免疫    RBP-4人視黃醇結合蛋白4酶聯免疫
EPO人紅細胞生成素酶聯免疫     RBP-4大鼠視黃醇結合蛋白4酶聯免疫
EPOR人紅細胞生成素受體酶聯免疫    RBC小鼠抗紅細胞抗體酶聯免疫 
TUBB人β-微管蛋白酶聯免疫    RBC人抗紅細胞抗體酶聯免疫 
PGF2α人前列腺素F2α酶聯免疫     RBC大鼠抗紅細胞抗體酶聯免疫 

步驟一

雙抗體夾心法

1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1～10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml，4℃ 過夜。次日，棄去孔內溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。（簡稱洗滌，下同）。

2.　加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中，置37℃ 孵育1小時。然后洗滌。（同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔）。

3.　加酶標抗體：于各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體（經滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時，洗滌。

4.　加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。

5.　終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。

6.　結果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結果：反應孔內顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺，依據所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調零后測各孔OD值，若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。

ELISA的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性，酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標本（測定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與液體中的其他物質分開。再加入酶標記的抗原或抗體，也通過反應而結合在固相載體上。此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例。加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產物，產物的量與標本中受檢物質的量直接相關，故可根據呈色的深淺進行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應的結果，使測定方法達到很高的敏感度。 ELISA可用于測定抗原，也可用于測定抗體。

然而，影響Elisa試驗結果的因素很多，故加強各個環節的質量保證才能充分發揮其方法學的優點。