細(xì)胞簡介：

兔肺小動脈內(nèi)皮分離自肺小動脈組織；肺動脈干是短而粗的動脈，自右心室的動脈圓錐起始，向左后上方斜升，先在升主動脈根部的前面，繼而至其左側(cè)，至主動脈弓的下方，約在第5胸椎高度，分為左、右肺動脈。左肺動脈較短，橫行向左，經(jīng)左主支氣管前方至左肺門，分兩支進(jìn)入左肺的上、下葉。右肺動脈較長，橫行向右，經(jīng)主動脈升部和上腔靜脈的后方達(dá)右肺門，分3支進(jìn)入右肺上、中、下葉。左、右肺動脈的各分支在肺實質(zhì)內(nèi)又反復(fù)分支，與支氣管的分支伴行，后達(dá)肺泡壁，形成稠密的毛細(xì)血管網(wǎng)。肺動脈輸送的是含二氧化碳較多的靜脈血。在肺動脈干分叉處稍左側(cè)與主動脈弓下緣之間有一結(jié)締組織索，稱動脈韌帶。管徑在0.3-1mm之間，為小動脈（small-artery），小動脈包括粗細(xì)不等的幾級分支，也屬肌性動脈。較大的小動脈，內(nèi)膜有明顯的內(nèi)彈性膜，中膜有幾層平滑肌，外膜厚度與中膜相近，一般沒有外彈性膜。口徑在1mm以下的動脈，管壁有完整的平滑肌層及少量的彈性纖維和膠質(zhì)纖維。小動脈是決定周圍循環(huán)阻力大小的主要因素，也是調(diào)節(jié)微循環(huán)灌注量的“總開關(guān)"。典型的小動脈，其管壁的厚度與管徑相比約為1∶2。中膜的肌層相對比其他動脈為厚，當(dāng)平滑肌在神經(jīng)支配下強力收縮時，其管腔可以體外培養(yǎng)閉塞，而使血液不能流入它所分布的毛細(xì)血管內(nèi)，從而增加了周圍血液循環(huán)的阻力。如果有許多小動脈同時收縮，可使血壓顯著上升。反之，當(dāng)小動脈的平滑肌舒張時，則可使大量的血液流入毛細(xì)血管，外周阻力明顯下降，血壓降低。終末小動脈(terminal arteri-ole)的口徑為20-30μm；后小動脈(metar-teriole)，又稱毛細(xì)血管前小動脈(precapil-lary arteriole)的口徑為12-15μm。管壁內(nèi)均有較稀疏的平滑肌，在毛細(xì)血管前小動脈分支的起始部分，管壁平滑肌成分增厚，叫做毛細(xì)血管前括約肌(precapillary sphinc-ter)，其收縮或舒張，可調(diào)節(jié)真毛細(xì)血管的血流量，是調(diào)節(jié)微循環(huán)灌注量的“分開關(guān)"。支配小動脈平滑肌的交感神經(jīng)纖維，可延伸到終末小動脈和后小動脈的平滑肌細(xì)胞。在毛細(xì)血管前括約肌上交感神經(jīng)纖維特別豐富。肺小動脈內(nèi)皮細(xì)胞呈單層多角形鋪路石狀分布，該細(xì)胞在維持血管內(nèi)外的動態(tài)平衡、合成和分泌細(xì)胞因子和介質(zhì)、維持凝血和纖溶的動態(tài)平衡中起重要作用。

方法簡介：

實驗室分離的兔肺小動脈內(nèi)皮采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法、并通過內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測：

實驗室分離的兔肺小動脈內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件：PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養(yǎng)基：基礎(chǔ)培養(yǎng)基，含FBS、EGF、bFGF、IGF、VEGF、Heparin、Hydrocortisone、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：內(nèi)皮細(xì)胞樣

傳代特性：可傳2-3代

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

兔肺小動脈內(nèi)皮體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

細(xì)胞傳代步驟：

如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

細(xì)胞復(fù)蘇步驟:

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

細(xì)胞凍存步驟:

待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例； 
1．細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，細(xì)胞變圓脫落后，加入2ml培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。 
2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識。本公司按每個凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個細(xì)胞凍存。
3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
公司正在出售的產(chǎn)品：

人載脂蛋白C2(Apo-C2)試劑盒

Human tumor specific growth factor / tumor associated factor (TSGF) ELISA Kit 人腫瘤特異生長因子/腫瘤相關(guān)因子(TSGF)試劑盒

Humannuclearfactor-κBp65,NF-κBp65ELISAKit 人核因子-κB亞基p65親和肽(NF-κBp65)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Humaninhibitorofapoptosis,IAP試劑盒人細(xì)胞凋亡抑制因子(IAP)試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-8)活性熒光定量試劑盒20次

HumanLegionellapneumophilaaigen，LPAgELISAKit人軍團(tuán)菌抗原(LPAg)試劑盒規(guī)格：96T/48T

人脂多糖試劑盒   人脂多糖試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   人脂多糖試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人脂多糖試劑盒、人脂多糖試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

人脂多糖結(jié)合蛋白試劑盒   人脂多糖結(jié)合蛋白試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   人脂多糖結(jié)合蛋白試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人脂多糖結(jié)合蛋白試劑盒、人脂多糖結(jié)合蛋白試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

人脂蛋白脂酶試劑盒   人脂蛋白脂酶試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   人脂蛋白脂酶試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人脂蛋白脂酶試劑盒、人脂蛋白脂酶試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

人脂蛋脂酶A2試劑盒   人脂蛋脂酶A2試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   人脂蛋脂酶A2試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人脂蛋脂酶A2試劑盒、人脂蛋脂酶A2 試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

蛋白激酶A錨定蛋白95抗體

豚鼠白三烯D4(LTD4)試劑盒 ，英文名： LTD4 ELISA Kit

Two amine oxidase (DAO) ELISA Kit 人氧化酶(DAO)試劑盒

RabbitmajorhistocompatibilitycomplexⅡ,MHCⅡ/RLAⅡELISAKit 兔主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類(MHCⅡ/RLAⅡ)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforBetaGAL(HumanAlpha-galactosidase)ELISAKit人β半乳糖苷酶

細(xì)菌鹽還原酶總活性比色法定量試劑盒20次

RabbitHeatShockProtein70,HSP-70ELISAKit兔熱休克蛋白70(HSP-70)試劑盒規(guī)格：96T/48T

脯羥化酶2抗體

TFPI2重組小鼠 TFPI2 / PP5 蛋白 Protein

FK506結(jié)合蛋白樣蛋白(FKBPL)重組蛋白 Recombinant FK506 Binding Protein Like Protein (FKBPL)

FKBP7重組人 PPIase / FKBP7 蛋白 Protein

IL9 Protein Human 重組人 IL-9 / Interleukin-9 蛋白

ERBB2 Protein Rat 重組大鼠 HER2 / ErbB2 蛋白

兔肺小動脈內(nèi)皮細(xì)胞α2-巨球蛋白(α2M)重組蛋白 Recombinant Alpha-2-Macroglobulin (a2M)

IL9 Protein Human 重組人 IL-9 / Interleukin-9 蛋白

ICOS重組小鼠 ICOS / AILIM / CD278 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

CDH18 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CDH18 / Cadherin-18 蛋白

HNRNPR重組人 HNRNPR / HNRNP-R / HNRNP R 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein