細胞傳代步驟：

如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

細胞簡介：

兔多巴胺神經元分離腦組織；多巴胺神經元，即：胺能神經元，主要指含多巴胺的神經元，其細胞體主要分布在黑質、腳間核和丘腦下部等處。在這些區域多巴胺含量很高。多巴胺在機體內合成時以酪為原料。腦內的多巴胺主要是由黑質細胞來合成，這些多巴胺參與錐體外系統的活動，與軀體運動機能有密切關系。腦內多巴胺代謝失常時，可引起震顫性麻痹(帕金森震顫)。多巴胺(Dopamine)，是NA的前體物質，是下丘腦和腦垂體腺中的一種關鍵神經遞質，中樞神經系統中多巴胺的濃度受精神因素的影響，神經末梢的GnRH和多巴胺間存在著軸突聯系并相互作用，以及多巴胺有抑制GnRH分泌的作用。中腦的神經原物質多巴胺(Dopamine)，則直接影響人們的情緒。從理論上來看，增加這種物質，就能讓人興奮，但是它會令人上癮。多巴胺在前腦和基底神經節(Basal Ganglia)出現，基底神經節負責處理恐懼的情緒，但由于多巴胺的緣故，取代了恐懼的感覺，因此有很多人的上癮行為，都是因多巴胺而起的。

方法簡介：

實驗室分離的兔多巴胺神經元采用消化法、神經元專用培養基培養篩選結合化學試劑抑制法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測：

實驗室分離的兔多巴胺神經元經TH免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養信息：

包被條件：PLL（0.1mg/ml）

培養基：含B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態：神經元細胞樣

傳代特性：屬于終末分化細胞；屬于不增殖細胞群

消化液：0.125%

培養條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

兔多巴胺神經元體外培養周期有限；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養，以此保證該細胞的佳培養狀態。

細胞復蘇步驟:

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

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MAG重組人 MAG / GMA / Siglec-4 蛋白 (Fc 標簽) Protein

細胞凍存步驟:

待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例；
1．細胞凍存時，棄去培養基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，細胞變圓脫落后，加入2ml培養基終止消化，可使用血球計數板計數。
2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。
3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。