細(xì)胞簡(jiǎn)介：

兔腸成纖維分離自腸道組織；腸道指的是從胃幽門至門的消化管。腸是消化管中長(zhǎng)的一段，也是功能重要的一段。哺乳動(dòng)物的腸包括小腸、大腸和直腸3大段。大量的消化作用和幾乎全部消化產(chǎn)物的吸收都是在小腸內(nèi)進(jìn)行的，大腸主要濃縮食物殘?jiān)纬杉S便，再通過(guò)直腸經(jīng)門排出體外。腸道堪稱身體勞累的器官——每天不停地消化、吸收食物，以提供足夠的養(yǎng)分，其實(shí)它的功能還遠(yuǎn)不止此——它還是機(jī)體內(nèi)大的微生態(tài)系統(tǒng)。各種哺乳動(dòng)物腸的結(jié)構(gòu)和功能基本相似。腸壁結(jié)構(gòu)一般分4層，由外向內(nèi)依次為：漿膜層（腹腔臟層），平滑肌層，黏膜下層和黏膜層。平滑肌層的外層為縱行肌纖維，內(nèi)層為環(huán)形肌纖維，兩者都以螺旋式走行，它們以收縮和舒張來(lái)完成腸的機(jī)械性消化。黏膜層又分為3層：靠近黏膜下層的是一層平滑肌，稱為黏膜肌層。其次為結(jié)締組織，又稱為固有層。后面向腸腔的是一層柱狀上皮細(xì)胞構(gòu)成的黏膜。成纖維細(xì)胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分，由胚胎時(shí)期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來(lái)。成纖維細(xì)胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細(xì)胞功能活動(dòng)旺盛，細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動(dòng)，在一定條件下，它可以實(shí)現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化；成纖維細(xì)胞對(duì)不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。

方法簡(jiǎn)介：

實(shí)驗(yàn)室分離的兔腸成纖維采用膠原酶-聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)：

實(shí)驗(yàn)室分離的兔腸成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣

傳代特性：可傳2-3代

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

兔腸成纖維體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

細(xì)胞傳代步驟：

如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

細(xì)胞復(fù)蘇步驟:

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

細(xì)胞凍存步驟:

待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例； 
1．細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，細(xì)胞變圓脫落后，加入2ml培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。 
2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。
3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
公司正在出售的產(chǎn)品：

小鼠肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)ELISA 試劑盒

Human varicella zoster virus IgM (VZV-IgM) ELISA Kit 人水痘帶狀皰疹病毒IgM(VZV-IgM)試劑盒

HumanFibrinogen,FbgELISAKit 人血纖蛋白原(Fbg)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HumanAi-ypsin,AT試劑盒人抗(AT)試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物氧化應(yīng)激活性氧(ROS)比色法定量試劑盒(羥自由基)20次

humananGSlaminase2Cpolypeptide，TGM2ELISAKit人轉(zhuǎn)酶2C多肽(TGM2)試劑盒規(guī)格：96T/48T

人轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β2(TGF-β2)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒   Human TGF-β2 (ansforming Growth Factor β2) ELISA Kit

人血小板生成素(TPO)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒   Human TPO (Thrombopoietin) ELISA Kit

人血小板反應(yīng)蛋白1(TSP-1)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒   Human TSP-1 (Thrombospondin-1) ELISA Kit

人血小板反應(yīng)蛋白2(TSP-2)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒   Human TSP-2 (Thrombospondin-2) ELISA Kit

CD10單克隆抗體

豚鼠鈣調(diào)素(CAM)試劑盒 ，英文名： CAM ELISA Kit

Human dopamine (DA) ELISA Kit 人多巴胺(DA)試劑盒

Rabbitai-neuophilgranulesaibody,ANGAELISAKit 兔子抗中性粒細(xì)胞顆粒抗體(ANGA)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforBFELISAKit大鼠B因子

細(xì)菌鐵型亞鹽還原酶活性比色法定量試劑盒20次

rabbitiercellularadhesionmolecule1,ICAM-1/CD54ELISAKit兔子細(xì)胞間粘附分子1(ICAM-1/CD54)試劑盒規(guī)格：96T/48T

鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶調(diào)節(jié)蛋白1抗體（唐氏綜合征候選區(qū)域蛋白1樣蛋白1）

AIMP1重組小鼠 AIMP1 / EMAP2 / SCYE1 蛋白 Protein

凋亡相關(guān)因子(FAS)重組蛋白 Recombinant Factor Related Apoptosis (FAS)

KCNIP3重組人 CSEN / Calsenilin / KCNIP3 蛋白 Protein

IL3 Protein Human 重組人 IL-3 / Interleukin-3 蛋白

LTBR Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 LTBR / TNFRSF3 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

兔腸成纖維細(xì)胞2,4-D/KLH(2,4-Dichlorophenoxyacetic acid 5mg2,4-D/KLH(2,4-Dichlorophenoxyacetic acid) 2，4-二氯苯氧乙酸偶聯(lián)血藍(lán)蛋白

IL3 Protein Human 重組人 IL-3 / Interleukin-3 蛋白

YWHAE重組小鼠 14-3-3 epsilon / YWHAE 蛋白 (GST 標(biāo)簽) Protein

IL3 Protein Rat 重組大鼠 IL3 / interleukin 3 蛋白

NRG1重組人 NRG1-beta 1 蛋白 (ECD) Protein