兔鼻黏膜上皮細(xì)胞

| 商品屬性：

| 細(xì)胞介紹：

兔鼻黏膜上皮分離自鼻黏膜組織；黏膜是覆蓋在機(jī)體內(nèi)消化、呼吸、泌尿、生殖等器官管腔內(nèi)壁的一層組織結(jié)構(gòu)，由上皮組織和疏松結(jié)締組織構(gòu)成。根據(jù)部位不同，有口腔黏膜、胃腸黏膜、鼻腔黏膜、氣管黏膜、陰道黏膜、眼瞼黏膜等不同名稱。它們的結(jié)構(gòu)也因功能、部位不一而不盡相同。鼻腔黏膜，簡稱鼻黏膜，覆蓋于鼻腔表面，黏膜下方為軟骨、骨或骨骼肌。根據(jù)結(jié)構(gòu)與功能的不同，鼻黏膜又分為前庭部、呼吸部和嗅部三部分。前庭部是鄰近外鼻孔的部分，有豐富的鼻毛可以阻擋空氣中較大的塵粒吸入。呼吸部占鼻黏膜的大部，有發(fā)達(dá)的上皮纖毛，它們可向咽部擺動(dòng)，黏著有塵粒、細(xì)菌的黏液排向咽部，終將它們排出體外。此外，此部分有豐富的血管與腺體，對吸入的空氣有加溫和濕潤作用。嗅部黏膜范圍較小，主要位于鼻腔頂部。它含有一種專司嗅覺的嗅細(xì)胞及嗅腺，它們分泌能溶解到達(dá)嗅區(qū)的含氣味的微粒，刺激嗅細(xì)胞表面上的嗅毛產(chǎn)生嗅覺，而且還由于嗅細(xì)胞具有不同的受體，可分別接受不同化學(xué)分子的刺激，因此可產(chǎn)生不同的嗅覺。

| 方法簡介：

實(shí)驗(yàn)室分離的兔鼻黏膜上皮采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法，并通過上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

| 質(zhì)量檢測：

實(shí)驗(yàn)室分離的兔鼻黏膜上皮經(jīng)Cytokeratin-18免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

| 培養(yǎng)信息：

包被條件：鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基：含FBS、EGF、Hydrocortisone、腎上腺素、甲狀腺素、Insulin、Transferrin、Selenium Solution、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣

傳代特性：可傳1-2代

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

兔鼻黏膜上皮體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)?

| 細(xì)胞培養(yǎng)操作：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

| 注意事項(xiàng)：

1. 收到非紅系有核細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn) 象發(fā)生請及 時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所 需細(xì)胞因子 等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件*。若由于培養(yǎng)條件不*而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問 題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用 75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題貼壁細(xì)胞會(huì)有少量 從瓶 壁脫落，將細(xì)胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng) 4~6 小時(shí),再取出觀察。此時(shí)多數(shù)細(xì)胞均 會(huì)貼壁，若細(xì)胞仍不能貼壁請用臺盼藍(lán) 染色測定細(xì)胞活力，如果證實(shí)細(xì)胞活力正常， 請將細(xì)胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng)；如果染色結(jié)果顯示細(xì)胞無活 力，請拍下 照片及時(shí)和我們聯(lián)系，信息確認(rèn)后我們?yōu)槟倜赓M(fèi)寄送一次。

4. 靜置細(xì)胞貼壁后，請將細(xì)胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基倒出，留 6~8mL 維持細(xì)胞正常培養(yǎng)，待ATCC CRL-1711(Sf9)細(xì) 胞匯 合度  80%左右時(shí)正常傳代。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶內(nèi)多余的培養(yǎng)基可收集備用，細(xì)胞 傳代時(shí)可以 一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合，使細(xì)胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前 3 天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和 技術(shù) 部 溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時(shí)和我們聯(lián) 系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們 的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7.該細(xì)胞僅供科研使用。

| 公司正在出售的產(chǎn)品

兔子層連蛋白/板層素(LN)ELISA 試劑盒

Human vascular endothelial cell growth factor C (VEGF-C) ELISA Kit 人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子C(VEGF-C)試劑盒

Humanai-gangliosideaibody,GM1ELISAKit 人抗抗體(GM1)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HumanErythropoietin,EPO試劑盒人紅細(xì)胞生成素(EPO)試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織RSK3激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次

HumanOsteogenicGrowthPeptide，OGPELISAKit人成骨生長肽(OGP)試劑盒規(guī)格：96T/48T

人轉(zhuǎn)鐵蛋白（F）試劑盒   96T/48T

人轉(zhuǎn)錄因子抗體-1(ATF-1)試劑盒   96T/48T

人轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白(T)試劑盒   96T/48T

人轉(zhuǎn)化生長因子β2(TGFβ2)試劑盒   96T/48T

RNA尿苷酸合酶結(jié)構(gòu)域蛋白2抗體

豚鼠干擾素α(IFNα)試劑盒 ，英文名： IFNα ELISA Kit

Calcium channel aibody (VGCC) ELISA Kit 人鈣離子通道抗體(VGCC)試劑盒

RabbitCoisolELISAKit 兔子(Coisol)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforBA(HumanBlockingaibody)ELISAKit人封閉抗體

線蟲基因組DNA分離試劑盒20次

Rabbitbonemorphogeneticproteins,BMPsELISAKit兔骨形成蛋白(BMPs)試劑盒規(guī)格：96T/48T

磷酸化叉頭蛋白家族1(Ser319)抗體

CD86重組大鼠 CD86 / B7-2 蛋白 Protein

HIV gp120 艾滋病病毒(抗原 0.5mgHIV gp120 艾滋病病毒(抗原)

HSPD1重組人 HSPD1 / HSP60 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein

IL27 Protein Human 重組人 IL27 / Interleukin-27 蛋白

HDAC8 Protein Mouse 重組小鼠 HDAC8 / HDACL1 蛋白

兔鼻黏膜上皮細(xì)胞HIV gp120 艾滋病病毒(抗原 0.5mgHIV gp120 艾滋病病毒(抗原)

IL27 Protein Human 重組人 IL27 / Interleukin-27 蛋白

CD86重組大鼠 CD86 / B7-2 蛋白 Protein

HDAC8 Protein Mouse 重組小鼠 HDAC8 / HDACL1 蛋白

HSPD1重組人 HSPD1 / HSP60 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein