細胞傳代步驟：

如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

細胞簡介：

兔主動脈外膜成纖維分離自主動脈血管外膜組織；血管外膜是由疏松結締組織組成，其中含螺旋狀或縱向分布的彈性纖維和膠原纖維。血管壁的結締組織細胞以成纖維細胞為主，當血管受損傷時，成纖維細胞具有修復外膜的能力。有的動脈中膜和外膜的交界處，有密集的彈性纖維組成的外彈性膜。成纖維細胞（Fibroblast）是疏松結締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質細胞分化而來。成纖維細胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構，其細胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質嗜弱堿性，具明顯的蛋白質合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現跟纖維細胞的互相轉化；成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。剛分離的血管外膜成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現為小的突起；6h后細胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。血管外膜成纖維細胞是血管外膜的主要組成細胞之一，其主要生理功能合成和釋放細胞外基質以及組織損傷后及時大量聚集修復損傷組織。

方法簡介：

實驗室分離的兔主動脈外膜成纖維采用-膠原酶混合酶消化后差速貼壁制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測：

實驗室分離的兔主動脈外膜成纖維經Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：成纖維細胞樣

傳代特性：可傳3-5代左右；3代以內狀態(tài)佳

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

兔主動脈外膜成纖維體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

細胞復蘇步驟:

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

公司正在出售的產品：

大鼠白介素1受體樣1(IL1RL1)試劑盒 ，英文名： IL1RL1 ELISA Kit

Mouse L-phenylalanine (LPA) ELISA Kit 小鼠苯(LPA)試劑盒

ELISA 小鼠白介素-4(mouse IL-4)  進口分裝

CLIAKitforIL-6(RabbitIerleukin6)ELISAKit兔白介素6

通用型雞病毒性關節(jié)呼腸孤病毒(Reovirus;REO)試劑盒20次

ELISAKitPI大鼠胰島素原

小鼠促胰液素   英文名稱：   Mouse Secretin   英文縮寫：   SCT

小鼠分泌型IgA   英文名稱：   Mouse secretory Immunoglobulin A   英文縮寫：   sIgA

小鼠抗小核糖核蛋白/SM抗體   英文名稱：   Mouse Small Nuclear Ribonucleoprotein Polypeptide/Sm   英文縮寫：   sNP/SM

小鼠超氧化物歧化酶   英文名稱：   Mouse Superoxide Dismase   英文縮寫：   SOD

ECM29蛋白抗體

小鼠降鈣素受體(C)ELISA 試劑盒 96T/48T

Three iodothyronine (T3) ELISA Kit 人三甲狀腺原(T3)試劑盒

HumanmembraneIgM,mIgMELISAKit 人表面膜免疫球蛋白M(mIgM)試劑盒 96T/48T 進口分裝

Humanai-deoxyribonucleaseB,ai-DNaseB試劑盒人抗DNA酶B抗體(ai-DNaseB)試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物基因組DNA化試劑盒(高多糖/酚)50次

Humanαmannosidase，αManaseELISAKit人β甘露糖苷酶(βManase)試劑盒規(guī)格：96T/48T

驅動蛋白家族成員13A抗體

ENPP2重組食蟹猴 Autotaxin / ENPP2 蛋白 Protein

HSP-60( Heat shock protein-60 0.5mgHSP-60( Heat shock protein-60) 熱休克蛋白-60(抗原)

PLTP重組人 PLTP 蛋白 Protein

EIF5 Protein Human 重組人 EIF-5A / EIF5 蛋白 (GST 標簽)

IFNGR1 Protein Mouse 重組小鼠 IFNGR1 / CD119 蛋白

兔主動脈外膜成纖維細胞HSP-60( Heat shock protein-60 0.5mgHSP-60( Heat shock protein-60) 熱休克蛋白-60(抗原)

EIF5 Protein Human 重組人 EIF-5A / EIF5 蛋白 (GST 標簽)

ENPP2重組食蟹猴 Autotaxin / ENPP2 蛋白 Protein

IFNGR1 Protein Mouse 重組小鼠 IFNGR1 / CD119 蛋白

PLTP重組人 PLTP 蛋白 Protein

細胞凍存步驟:

待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例； 
1．細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，細胞變圓脫落后，加入2ml培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數板計數。 
2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。
3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。