細(xì)胞名稱 中國倉鼠卵巢細(xì)胞；CHO-HCV-NS4A

形態(tài)特性 上皮細(xì)胞樣

生長特性 貼壁生長

特征特性 CHO-HCV-NS4A細(xì)胞整合有丙型肝炎病毒的NS4A基因，能穩(wěn)定表達(dá)NS4A蛋白，是HCV基礎(chǔ)研究的*摸型。它由武漢大學(xué)病毒學(xué)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室郭佳博士于2008年構(gòu)建并保存。

培養(yǎng)條件 DMEM/F12(1:1): Ham's F12/DME Medium (DME H-16/F-12 50% Mixture w/o HEPES, with NEAA Medium) 10%FBS

傳代方法 1:3傳代,2-3天傳一代

傳代情況 C20

凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS

支原體檢測 陰性

STR

同工酶 同工酶鑒定

染色體

產(chǎn)品圖片：

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：
1.研究的對象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長時(shí)間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

匹克氏肉湯基礎(chǔ) 規(guī)格:  100g 作用：  用于溶血性鏈球菌的增菌培養(yǎng)(參考GB/T4789.28－2003 中4.62，GB/T4789.11－2003)。 英文名稱： CD36
肉浸液肉湯 規(guī)格:  250g 作用：  用于金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌和蠟樣芽孢桿菌的培養(yǎng)（GB標(biāo)準(zhǔn)） 英文名稱： KLK11
葡萄糖肉浸液肉湯 規(guī)格:  250g 作用：  用于溶血性鏈球菌及其它營養(yǎng)要求較高的細(xì)菌的增菌培養(yǎng)(GB/T4789.28－2003 中4.1 GB/T4789.11－2... 英文名稱： CD97
哥倫比亞瓊脂培養(yǎng)基 規(guī)格:  250g 作用：  用于營養(yǎng)要求較高的細(xì)菌的培養(yǎng)及溶血試驗(yàn)，還用于藥品中梭菌的檢測。(《中華人民共和國藥典》201... 英文名稱： NTRK3
血瓊脂培養(yǎng)基基礎(chǔ) 規(guī)格:  250g 作用：  加入脫纖維羊血或兔血，制成血瓊脂培養(yǎng)基，用于營養(yǎng)要求較高的細(xì)菌的培養(yǎng)及溶血試驗(yàn)(GB 4789.10－... 英文名稱： HA
胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基 規(guī)格:  250g 作用：  可廣泛應(yīng)用于細(xì)菌的培養(yǎng)，特別用于消毒劑消毒效果的測試、金黃色葡萄球菌的非選擇性增菌培養(yǎng)及蠟... 英文名稱： HA
Fraser肉湯增菌液FB1配套試劑 規(guī)格:  2x5支 作用：  試劑A和試劑B各一支添加于225ml（026080）中配成FB1增菌液。 英文名稱： SPARCL1
PALCAM瓊脂凍干配套試劑 規(guī)格:  10支 作用：  每支添加于100ml（026070）中配成PALCAM瓊脂。 英文名稱： IL1RL1
李氏增菌液LB2凍干配套試劑 規(guī)格:  10支 作用：  每支添加于200ml（026040）中配成LB2增菌液。 英文名稱： IL13RA1
李氏增菌液LB1凍干配套試劑 規(guī)格:  10支 作用：  每支添加于225ml（026040）中配成LB1增菌液。 英文名稱： PECAM1
EB增菌液凍干配套試劑 規(guī)格:  10支 作用：  每支添加于225ml（026010）中配成EB增菌液。 英文名稱： TNF

準(zhǔn)品 

" 15mg

14685-79-1 2-脫氧-2-氟-D-葡萄糖相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品 10mg

514-36-3 醋酸氟氫可的松標(biāo)準(zhǔn)品 Fludrocortisone Acetate 250mg

78755-81-4 氟馬西尼標(biāo)準(zhǔn)品 Flumazenil 200mg

氟馬西尼相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 20mg

氟馬西尼相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品 Flumazenil Related Compound B 20mg

1188-33-6 氟馬西尼相關(guān)物質(zhì)C標(biāo)準(zhǔn)品 Flumazenil Related Compound C 500mg

2002-29-1 雙氟美松叔戊酸酯標(biāo)準(zhǔn)品 Flumethasone Pivalate 200mg

77326-96-6 氟尼縮松標(biāo)準(zhǔn)品 Flunisolide 200mg

42461-84-7 氟尼辛葡標(biāo)準(zhǔn)品 Flunixin Meglumine 300mg

67-73-2 醋酸膚輕松標(biāo)準(zhǔn)品 Fluocinolone Acetonide 100mg

356-12-7 醋酸氟輕松標(biāo)準(zhǔn)品 Fluocinonide 100mg

2321-7-5 熒光素標(biāo)準(zhǔn)品 Fluorescein 200mg

氟化牙粉：氟化鈉/二氧化硅標(biāo)準(zhǔn)品 4.5oz

氟化牙粉：氟化鈉/碳酸氫鈉粉標(biāo)準(zhǔn)品 4oz

氟化牙粉：單氟磷酸鈉-碳酸鈣標(biāo)準(zhǔn)品 4.6oz

氟化牙粉：單氟磷酸鈉/磷酸氫鈣標(biāo)準(zhǔn)品 4.6oz

"氟化牙粉：單氟磷酸鈉(1000 ppm)/二氧化硅標(biāo)準(zhǔn)品 

" 5.25oz

氟化牙粉：單氟磷酸鈉(1500 ppm)/二氧化硅標(biāo)準(zhǔn)品 5.25oz

氟化牙粉：氟化亞錫-二氧化硅標(biāo)準(zhǔn)品 4oz

426-13-1 氟米龍標(biāo)準(zhǔn)品 Fluorometholone 200mg

3801-6-7 氟米龍醋酸酯標(biāo)準(zhǔn)品 Fluorometholone Acetate 200mg

86393-33-1 環(huán)丙羧酸標(biāo)準(zhǔn)品 Fluo

熒光素標(biāo)記CD2F-10抗體IgG

Anti-CD3/FITC  熒光素標(biāo)記CD3蛋白抗體IgG

Anti-CD3/RBITC  紅色熒光素羅丹明標(biāo)記CD3抗體IgG

Anti-CD3/PE  熒光素PE標(biāo)記CD3抗體IgG

Anti-CD4/FITC  熒光素標(biāo)記CD4蛋白抗體IgG

Anti-CD4/RBITC  紅色熒光素羅丹明(RBITC)標(biāo)記CD4抗體IgG

Anti-CD4/PE  熒光素PE標(biāo)記CD4抗體IgG

Anti-CD5/FITC  熒光素標(biāo)記CD5抗體IgG

Anti-CD5L/Api6/FITC  熒光素標(biāo)記CD5L抗體IgG

Anti-CD6/TP120/FITC  熒光素標(biāo)記CD6抗體IgG

Anti-CD7/FITC  熒光素標(biāo)記抗CD7抗體IgG

Anti-CD8/FITC  熒光素標(biāo)記CD8蛋白抗體IgG

Anti-CD9/MRP-1/FITC  熒光素標(biāo)記CD9抗體IgG

Anti-CD10/CALLA/FITC  熒光素標(biāo)記CD10抗體IgG

Anti-CD13/FITC  熒光素標(biāo)記氨肽酶N抗體IgG

Anti-CD14/FITC  熒光素標(biāo)記CD14蛋白抗體IgG

Anti-CD17/FITC  熒光素標(biāo)記CD17抗體IgG

中國倉鼠卵巢細(xì)胞；CHO-HCV-NS4AAnti-CD18/LFA-1/FITC  熒光素標(biāo)記白細(xì)胞粘附蛋白抗體IgG

Anti-CD19/FITC  熒光素標(biāo)記CD19抗體IgG

Anti-Phospho-CD19 (Tyr531) /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化CD19抗體IgG

Anti-CD19/PE  熒光素PE標(biāo)記CD19抗

操作方法:
1. 從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA (質(zhì)粒或連接產(chǎn)物) 并用手EP管底輕輕混勻 (避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
3. 向離心管中加入0.9 mL室溫S.O.C.或LB培養(yǎng)基(S.O.C.營養(yǎng)豐富，可提高轉(zhuǎn)化效率)。
4. 37℃，225 rpm復(fù)蘇60分鐘或30℃，225 rpm復(fù)蘇90分鐘。
(當(dāng)質(zhì)粒中含有不穩(wěn)定片段時(shí)，30℃培養(yǎng)可降低錯(cuò)誤重組的概率，若轉(zhuǎn)化control pUC19計(jì)算轉(zhuǎn)化效率，則需37℃，225 rpm復(fù)蘇60分鐘）
5. 5000rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的S.O.C. 或LB培養(yǎng)基上。