細(xì)胞名稱 小鼠雜交瘤細(xì)胞株；5E4G5

形態(tài)特性 淋巴母細(xì)胞樣

生長特性 懸浮生長

特征特性 該細(xì)胞屬保藏，其特征特性尚未公開。

培養(yǎng)條件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 10%FBS

傳代方法 1:3傳代，3-4天傳1次

傳代情況 C5

凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS

支原體檢測 陰性

STR

同工酶

染色體

產(chǎn)品圖片：

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：
1.研究的對象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長時(shí)間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

匹克氏肉湯基礎(chǔ) 規(guī)格:  100g 作用：  用于溶血性鏈球菌的增菌培養(yǎng)(參考GB/T4789.28－2003 中4.62，GB/T4789.11－2003)。 英文名稱： CD36
肉浸液肉湯 規(guī)格:  250g 作用：  用于金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌和蠟樣芽孢桿菌的培養(yǎng)（GB標(biāo)準(zhǔn)） 英文名稱： KLK11
葡萄糖肉浸液肉湯 規(guī)格:  250g 作用：  用于溶血性鏈球菌及其它營養(yǎng)要求較高的細(xì)菌的增菌培養(yǎng)(GB/T4789.28－2003 中4.1 GB/T4789.11－2... 英文名稱： CD97
哥倫比亞瓊脂培養(yǎng)基 規(guī)格:  250g 作用：  用于營養(yǎng)要求較高的細(xì)菌的培養(yǎng)及溶血試驗(yàn)，還用于藥品中梭菌的檢測。(《中華人民共和國藥典》201... 英文名稱： NTRK3
血瓊脂培養(yǎng)基基礎(chǔ) 規(guī)格:  250g 作用：  加入脫纖維羊血或兔血，制成血瓊脂培養(yǎng)基，用于營養(yǎng)要求較高的細(xì)菌的培養(yǎng)及溶血試驗(yàn)(GB 4789.10－... 英文名稱： HA
胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基 規(guī)格:  250g 作用：  可廣泛應(yīng)用于細(xì)菌的培養(yǎng)，特別用于消毒劑消毒效果的測試、金黃色葡萄球菌的非選擇性增菌培養(yǎng)及蠟... 英文名稱： HA
Fraser肉湯增菌液FB1配套試劑 規(guī)格:  2x5支 作用：  試劑A和試劑B各一支添加于225ml（026080）中配成FB1增菌液。 英文名稱： SPARCL1
PALCAM瓊脂凍干配套試劑 規(guī)格:  10支 作用：  每支添加于100ml（026070）中配成PALCAM瓊脂。 英文名稱： IL1RL1
李氏增菌液LB2凍干配套試劑 規(guī)格:  10支 作用：  每支添加于200ml（026040）中配成LB2增菌液。 英文名稱： IL13RA1
李氏增菌液LB1凍干配套試劑 規(guī)格:  10支 作用：  每支添加于225ml（026040）中配成LB1增菌液。 英文名稱： PECAM1
EB增菌液凍干配套試劑 規(guī)格:  10支 作用：  每支添加于225ml（026010）中配成EB增菌液。 英文名稱： TNF

Anti-KT3 tag/HRP  辣根過氧化物酶標(biāo)記KT3 tag標(biāo)簽抗體IgG

Anti-KCNA5/FITC  熒光素標(biāo)記鉀通道混合相關(guān)蛋白亞型5抗體IgG

Anti-Ku-70/FITC  熒光素標(biāo)記DNA修復(fù)酶Ku70抗體IgG

Anti-Ku-80/FITC  熒光素標(biāo)記DNA修復(fù)酶Ku-80抗體IgG

Anti-KCNA7/FITC  熒光素標(biāo)記鉀電壓閥門通道混合器相關(guān)亞家族成員7抗體IgG

Anti-κOR/FITC  熒光素標(biāo)記kappa型阿片受體抗體IgG

Anti-Kv1.3/FITC  熒光素標(biāo)記離子通道蛋白Kv1.3抗體IgG

Anti-Kv3.3/Kcnc3/FITC  熒光素標(biāo)記離子通道蛋白Kv3.3抗體IgG

Anti-KSR1/FITC  熒光素標(biāo)記Ras信號轉(zhuǎn)導(dǎo)KSR1蛋白抗體IgG

Anti-Phospho-KSR1 (Ser392) /FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化Ras信號轉(zhuǎn)導(dǎo)KSR1蛋白抗體IgG

Anti-KCNC4/KV3.4/FITC  熒光素標(biāo)記離子通道蛋白Kv3.4抗體IgG

Anti-Lectin/FITC  熒光素標(biāo)記抗凝集素抗體IgG

Anti-LEF-1/FITC  熒光素標(biāo)記淋巴增強(qiáng)因子-1抗體IgG

Anti-L-enk/FITC  熒光素標(biāo)記抗亮氨酸腦啡肽抗體IgG

Anti- Beta-lactoglobulin/FITC  熒光素標(biāo)記牛β-乳球蛋白抗體IgG

Anti- Beta-lactoglobulin/FITC  熒光素標(biāo)記牛β-乳球蛋白抗體IgG

Anti- Beta-lactoglobulin/FITC  熒光素標(biāo)記牛β-乳球蛋白抗體IgG

Anti-Laminin alpha5/FITC  熒光素標(biāo)記層粘蛋白α5抗體IgG

Anti-LAG-3/CD223/FITC  熒光素標(biāo)記淋巴細(xì)胞活化基因-3抗體IgG

Anti-lamin A/FITC  熒光素標(biāo)記核纖層蛋白A抗體IgG

Anti-Laminin Beta1/FITC  熒光素標(biāo)記層粘連蛋白β1抗體IgG

Anti-lamin B/FITC  熒光素標(biāo)記核纖層蛋白B抗體IgG

Anti-lamin C/FITC  熒光素標(biāo)記核纖層蛋白C抗體IgG

Anti-Phospho-Lamin A/C (Ser22) /FITC  熒光素標(biāo)記磷

脫水穿心蓮內(nèi)酯 Dehydroandrographolide ≥98%

脫水羊藿素 Anhydroicaritin ≥98%

文多靈 Vindoline ≥98%

烏藥醚內(nèi)酯 Linderane ≥94%

吳茱萸次堿 Rutaecarpine ≥99%

吳茱萸堿 Evodiamine ≥99%

吳茱萸內(nèi)酯 Evodine ≥98%

五內(nèi)脂 Schisanlactone E ≥98%

五味子丙素 Schisandrin C ≥98%

五味子醇甲 Gomisin A/Schisandrin ≥98%

五味子醇乙 SCHISANDROL B 97%

五味子甲素 Schisandrin A ≥98%

五味子乙素 Schisandrin B ≥97%

五味子酯甲 Schisantherin A ≥98%

西貝堿 即西貝母堿 98%

西貝母堿 IMPERIALINE 98%

西紅花苷Ⅱ Crocin II ≥97%

西紅花苷-I（藏紅花素） Crocin-I ≥95%

西羅莫司 Sirolimus ≥97%

西瑞香素 Dephnoretin 98%

喜樹堿 Camptothecine ≥98%

細(xì)辛醛 Asarylaldehyde ≥98%

細(xì)辛脂素 Asarinin ≥95%

夏佛塔苷 Schaftoside 95%

仙茅苷 curculigoside 98%

腺苷 Adenosine 98%

相思豆堿 alpha-Methyl-L(+)-tryptophan 95%

香草酸 Vanillic acid 98%

香豆素 coumarin ≥98%

香蘭素 Vanillin ≥98%

香蒲新苷 Typhaneoside ≥98%

香葉木素 Diosmetin 95%

小白菊內(nèi)酯 Parthenolide ≥98%

小鼠雜交瘤細(xì)胞株；5E4G5辛夷脂素 Fargesin ≥98%

新橙皮苷 Neohesperidin ≥98%

新橙皮苷二氫查爾酮 Neosperidin dihydrochalcone 97%

新穿心蓮內(nèi)酯 Neoandrographol

操作方法:
1. 從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA (質(zhì)粒或連接產(chǎn)物) 并用手EP管底輕輕混勻 (避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。
3. 向離心管中加入0.9 mL室溫S.O.C.或LB培養(yǎng)基(S.O.C.營養(yǎng)豐富，可提高轉(zhuǎn)化效率)。
4. 37℃，225 rpm復(fù)蘇60分鐘或30℃，225 rpm復(fù)蘇90分鐘。
(當(dāng)質(zhì)粒中含有不穩(wěn)定片段時(shí)，30℃培養(yǎng)可降低錯(cuò)誤重組的概率，若轉(zhuǎn)化control pUC19計(jì)算轉(zhuǎn)化效率，則需37℃，225 rpm復(fù)蘇60分鐘）
5. 5000rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的S.O.C. 或LB培養(yǎng)基上。