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HuT78(T淋巴細胞白血病細胞)
【細胞復蘇的方法】:
(l)從液氮中取出冷凍管,迅速投入37~42℃水浴中,晃動,使其盡快融化(1分鐘左右)。
(2)用培養液稀釋至原體積的10倍以上,直接培養。
(3)或低速離心,去上清,加新鮮培養液培養。
制備細胞懸液:
1.吸棄上清液。
2.向離心管內加入 10ml 培養液,吹打制成細胞懸液。
細胞計數:細胞濃度以 5×105/ml 為宜。
培養細胞 :將復合細胞計數要求的細胞懸液分裝入培養瓶內 ,將培養瓶放入37℃和5%CO2的培養箱內2-4小時(或者 24-48 小時)后換液繼續培養培養,換液的時間由細胞情況而定。
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初學者易犯錯誤:
1 水浴鍋未預熱或者未預熱到 37℃。
2.水浴鍋內凍存管太多,導致傳熱不佳,使融化時間延長。
3.離心前忘記平衡,導致離心機損壞和細胞丟失。
4.一次復蘇細胞過多,忘記更換吸頭和吸管,導致細胞交叉污染。
細胞計數實驗原理:當待測細胞懸液中細胞均勻分布時,通過測定一定體積懸液中的細胞數目,即可換算出每毫升細胞懸液中細胞的細胞數目。
準備工作:取一瓶傳代的細胞,按照《傳代細胞培養(消化法)》中的傳代方法繁殖細胞,待 長成單層后以被使用。
細胞懸液制備:細胞懸液的制備方法是用 0.25%的胰蛋白酶液消化、PBS液洗滌后,加入培養液(或 Hanks 液或 PBS等平衡鹽溶液),吹打制成待測細胞懸液。
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