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BEL-7402(肝癌細胞)
【細胞復蘇的方法】:
(l)從液氮中取出冷凍管,迅速投入37~42℃水浴中,晃動,使其盡快融化(1分鐘左右)。
(2)用培養液稀釋至原體積的10倍以上,直接培養。
(3)或低速離心,去上清,加新鮮培養液培養。
注意事項:
1.嚴格執行高壓鍋的操作規程:高壓消毒時,先檢查鍋內是否有蒸餾水,以防高壓時燒干,水不能過多因為其將使空氣流暢受阻,會降低高壓消毒效果。檢查安全閥是否通暢,以防高壓時爆炸。
2.安裝濾膜時注意光面朝上:注意濾膜光滑一面是正面,要朝上,否則起不到過濾的作用。 3.注意人體的防護和器皿的*浸泡:A.泡酸時要戴耐酸手套,防止酸液濺起傷害人體。B.從酸缸內撈取器皿時防止酸液濺到地面,會腐蝕地面。C.器皿浸入酸液中要*,不能留有氣泡,以防止泡酸不*。
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水的制備: 細胞培養用水必須非常純凈,不含有離子和其他的雜質。需要用新鮮的雙蒸水、三蒸水或純凈水
PBS的制備與消毒(也可用于其它 BSS,如:Hanks,D-Hanks 液的配制):
1.溶解定容:將藥品(NaCl 8.0g,KCl 0.2g,Na2HPO4•H2O 1.56g,KH2PO40. 2g )倒入盛
有雙蒸水的燒杯中,玻璃棒攪動,充分溶解,然后把溶液倒入容量瓶中準確定容至 1000ml,搖勻即成新配制的 PBS溶液。
2.移入溶液瓶內待消毒:將 PBS倒入溶液瓶(大的吊針瓶)內,蓋上膠帽,并插上針頭放入高壓鍋內8 磅消毒 20 分鐘。注意高壓消毒后要用滅菌蒸餾水補充蒸發掉的水份。
胰蛋白酶溶液的配制與消毒:胰蛋白酶的作用是使細胞間的蛋白質水解從而使細胞離散。不同的組織或者細胞對胰酶的作用反應不一樣。胰酶分散細胞的活性還與其濃度、溫度和作用時間有關,在 pH為 8.0、溫度為 37℃時,胰酶溶液的作用能力zui強。使用胰酶時,應把握好濃度、溫度和時間,以免消化過度造成細胞損傷。因Ca2+、Mg2+和血清、蛋白質克降低胰酶的活性,所以配制胰酶溶液時應選用不含Ca2+、Mg2+的 BSS,如:D-Hanks液。終止消化時,可用含有血清培養液或者胰酶抑制劑終止胰酶對細胞的作用。
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