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R 1610(中國倉鼠體細胞)
【細胞復蘇的方法】:
(l)從液氮中取出冷凍管,迅速投入37~42℃水浴中,晃動,使其盡快融化(1分鐘左右)。
(2)用培養液稀釋至原體積的10倍以上,直接培養。
(3)或低速離心,去上清,加新鮮培養液培養。
細胞懸液制備:細胞懸液的制備方法是用 0.25%的胰蛋白酶液消化、PBS液洗滌后,加入培養液(或 Hanks 液或 PBS等平衡鹽溶液),吹打制成待測細胞懸液。
細胞計數:
1.蓋好蓋玻片:取一套血球計數板,將特制的蓋玻片蓋在血球計數槽上。
2.制備計數用的細胞懸液:用吸管吸 5滴細胞懸液到一離心管中,加入 5滴臺盼藍染
液(0.4%)或苯胺黑,活細胞不會被染色,加入染液后就可以在顯微鏡下區別活細胞和死細胞。
3.將細胞懸液滴入計數板:將待測細胞懸液吹均勻,然后吸取少量懸液沿蓋片邊緣緩緩滴入,要保證蓋片下充滿懸液,注意蓋片下不要有氣泡,也不能讓懸液流入旁邊槽中。
4.統計四個大格的細胞數:將血球計數板放于顯微鏡的低倍鏡下觀察,并移動計數板,當看到鏡中出現計數方格后,數出四角的四個大鉻(每個大格含有 16 個中鉻)中沒有被染液染上色的細胞數目。
5.計算原細胞懸液的細胞數:按照下面公式計算細胞密度:(細胞懸液的細胞數)/ml= ( 四個大格子細胞數/4) ×2×104
說明:公式中除以4 因為計數了4 個大格的細胞數。公式中乘以2因為細胞懸液于染液是 1:1 稀釋。公式中乘以 104 因為計數板中每一個大格的體積為:1.0mm(長)×1.0mm(寬)×0.1mm(高)=0.1mm3 而 1ml=1000mm3
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