J774A1（單核細胞巨噬細胞） 
在細胞凍存時加入溫保護劑，能大大提高凍存效果。常用的低溫保護劑是DMSO，它是一種滲透性保護劑，可迅速透入細胞，提高胞膜對水的通透性，降低冰點，延緩凍結過程，能使細胞內水分在凍結前透出細胞外，在胞外形成冰晶，減少胞內冰晶，從而減少冰晶對細胞的損傷。

準備工作：取一瓶傳代的細胞，按照《傳代細胞培養（消化法）》中的傳代方法繁殖細胞，待 長成單層后以被使用。
細胞懸液制備：細胞懸液的制備方法是用 0.25％的胰蛋白酶液消化、PBS液洗滌后，加入培養液（或 Hanks 液或 PBS等平衡鹽溶液），吹打制成待測細胞懸液。
細胞計數：
1.蓋好蓋玻片：取一套血球計數板，將特制的蓋玻片蓋在血球計數槽上。
2.制備計數用的細胞懸液：用吸管吸 5滴細胞懸液到一離心管中，加入 5滴臺盼藍染
液（0.4％）或苯胺黑，活細胞不會被染色，加入染液后就可以在顯微鏡下區別活細胞和死細胞。
3.將細胞懸液滴入計數板：將待測細胞懸液吹均勻，然后吸取少量懸液沿蓋片邊緣緩緩滴入，要保證蓋片下充滿懸液，注意蓋片下不要有氣泡，也不能讓懸液流入旁邊槽中。
4.統計四個大格的細胞數：將血球計數板放于顯微鏡的低倍鏡下觀察，并移動計數板，當看到鏡中出現計數方格后，數出四角的四個大鉻（每個大格含有 16 個中鉻）中沒有被染液染上色的細胞數目。
5.計算原細胞懸液的細胞數:按照下面公式計算細胞密度：（細胞懸液的細胞數）/ml＝ （ 四個大格子細胞數/4） ×2×104
說明：公式中除以4 因為計數了4 個大格的細胞數。公式中乘以2因為細胞懸液于染液是 1：1 稀釋。公式中乘以 104 因為計數板中每一個大格的體積為：1.0mm（長）×1.0mm（寬）×0.1mm（高）＝0.1mm3 而 1ml＝1000mm3

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