細胞培養注意事項：

公司產品僅用于科研關于原代細胞培養的注意事項。原代細胞培養是一項非常重要的實驗技術，掌握好這些注意事項，能讓你的實驗更順利。

首先，無菌操作是關鍵。一定要保持操作環境的清潔，避免細菌或霉菌污染，否則實驗就會失敗。

其次，選擇適合的培養基和血清也很重要。不同細胞對培養基和血清的需求不同，所以要根據細胞類型來選擇合適的培養基和血清。

另外，也是細胞培養中的成分。要新鮮配制，在貯存過程中也要定期補充。

在細胞培養過程中，靜置培養也是非常重要的。細胞在消化分離后需要一定的時間來適應新環境，所以在這段時間內要避免頻繁取出培養瓶觀察。

此外，消化時間也要控制得當。通常消化至肉眼可見微小組織顆粒即可，過長的消化時間會導致細胞損傷加重，影響細胞培養成活率。

最后，對于一些特殊類型的細胞，可能需要添加一些特殊的生長因子來促進細胞生長和增殖。但需要注意的是，這些生長因子的費用通常較高。

一、細胞基本屬性

細胞詳述

小腸位于腹中，上端接幽門與胃相通，下端通過闌門與大腸相連。小腸與心互為表里。是食物消化吸收的主要場所，盤曲于腹腔內，上連胃幽門，下接盲腸，全長約5－6米，張開有半個籃球大，分為十二指腸、空腸和回腸三部分。其管壁由黏膜，黏膜下層，肌層和漿膜構成。其結構特點是管壁有環形皺襞，黏膜有許多絨毛，絨毛根部的上皮下陷至固有層，形成管狀的腸腺，其開口位于絨毛根部之間。絨毛和腸腺與小腸的消化和吸收功能關系密切。

該細胞通過慢病毒轉染的方式攜帶SV40基因。

注意事項：  收到細胞后第一次傳代建議1：2傳代，充液培養基是維持培養基，不能用來培養細胞。

細胞特性

1） 組織來源于實驗動物的正常小腸組織。

2） 細胞鑒定：細胞角蛋白-19（CK-19）免疫熒光染色為陽性。

3） 經鑒定細胞純度高于90%。

4） 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。

5） 細胞生長方式：鋪路石狀細胞，不規則細胞，貼壁培養。

二、使用方法：

客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。

1. 取出T25細胞培養瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置3-4h，以穩定細胞狀態。

2. 貼壁細胞消化

1)吸出T25細胞培養瓶中的培養基，用PBS清洗細胞一次；

2)添加0.25%消化液1mL至T25培養瓶中，輕微轉動培養瓶至消化液覆蓋整個培養瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml培養基終止消化；

3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養瓶傳代，然后補充新鮮的培養基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置培養；

4)待細胞貼壁后，培養觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養基。

3. 細胞收貨脫落

1)收集所有細胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀；

2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內加入5ml培養基終止消化；

3)經1000rpm，離心5min，丟棄上清，用5ml培養基重懸沉淀，接種于新的培養瓶內；

4)待細胞貼壁后，培養觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養基(37℃預熱)。

5)原瓶內貼壁細胞按正常消化處理。

4. 細胞實驗

因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養板、共聚焦培養皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。

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