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上海恒遠吳經理小談elisa實驗操作的注意事項
閱讀：1385 發布時間：2015-11-5昨天我司的吳在頁面留言中看到了一個新手朋友的求助。
客戶：我用ELISA雙抗夾心的方法檢測NGF，做出的標準曲線數值很低，搞不懂是什么原因造成的，我是新手不知是否有些細節自己沒有注意到
吳：如果試劑盒很貴，自己又沒有操作過建議找專也人員幫你做！
客 戶：試劑盒是很貴，不過我還是希望自己能做出來。
吳：你用的是人血清還是組織勻漿？注意滴加計量的把握！查過文獻嗎？它在你的組織中表達是否較高？
客戶：我要檢測的是細胞培養基中細胞分泌的蛋白量，表達量不高，作出來的幾個曲線很不標準，線性關系不明顯，我不知道是為什么。
吳：ELISA 是一種敏感性高、特異性強、重復性好的實驗診斷方法，由于其試劑穩定、易保存、操作簡便、結果判斷較客觀等因素，以及既適宜于大規模篩查試驗又可以用于少量標本的檢測，既可以做定性試驗也可以做定量分析等優點，已廣泛應用于微生物學、寄生蟲學、腫瘤學和細胞因子等領域。ELISA 的影響因素較多，加強質量管理才能充分發揮其方法學的優點。一般加標本一般用微量加樣器，按規定的量加入板孔中。每次加標本應更換吸嘴，以免發生交叉污染，也可用一次性的定量塑料管加樣。有此測定（如間接法 ELISA ）需用稀釋的血清，可在試管中按規定的稀釋度稀釋后再加樣。也可在板孔中加入稀釋液，再在其中加入血清標本，然后在微型震蕩器上震蕩1 分鐘以保證混和。加酶結合物應用液和底物應用液時可用定量多道加液器，使加液過程迅速完成。垂直加入,避免漏吸或少吸,洗滌時避免串孔等等諸多值得注意的地方.所以一定要多加練習!
相信經過吳的全面解析這位朋友下次的實驗一定會成功的。
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