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恒遠公司技術支招:如何整理酶標儀得出的實驗數據
閱讀:1592 發布時間:2015-12-3酶聯免疫檢測儀是酶聯免疫吸附試驗的儀器又稱微孔板檢測器。可簡單地分為半自動和全自動2大類,但其工作原理基本上都是一致的,其核心都是一個比色計,即用比色法來進行分析。 測定一般要求測試液的zui終體積在250μL以下,用一般光電比色計無法完成測試,因此對酶標儀中的光電比色計有特殊要求。
光通過被檢測物,前后的能量差異即是被檢測物吸收掉的能量,特定波長下,同一種被檢測物的濃度與被吸收的能量成定量關系。檢測單位用OD值表示, OD是optical density(光密度)的縮寫,表示被檢測物吸收掉的光密度, OD=log(1/trans),其中trans為檢測物的透光值。根據Bouger-amberT-beer法則,OD值與光強度成下述關系:
E=OD=log(lo/Ι) 其中E表示被吸收的光密度, Ιo 為在檢測物之前的光強度,Ι為從被檢測物出來的光強度。
OD值公式計算:
c為檢測物的濃度 b為檢測物的厚度 a為摩爾因子
在特定波長下測定每一種物質都有其特定的波長,在此波長下,此物質能夠吸收zui多的光能量。如果選擇其它的波長段,就會造成檢測結果的不準確。因此,在測定檢測物時,我們選擇特定的波長進行檢測,稱為測量波長。
檢測值計算
儀器中的檢測器接收透過被檢測物的光能量,轉換成二進位數字信號,zui大為4095。儀器定義沒有光源下的透光值為 0%,沒有檢測物的透光值為100%。則實際檢測中,檢測物的透光值均在 0%一100%之間。透光值
的計算如下:
T=(Meas-Min)/(Max-Min)
其中T為透光值, Meas為檢測的二進位數值, Min為在 0%的情況下檢測的二進位數值, Max為在100%的情況下檢測的二進位數值,舉例如下:
MaX=3600
Min=20
Meas=30
T=(30-20)/3600-20)=0.0028
OD=log(1/T)=log(1/0.0028)=2.552