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    在ELISA中除了包被外，一般需進行45加樣。其中“45加樣”是什么意思呢？這里的45加樣，應當為45度加樣，即加樣槍的吸頭所在的直線應當與板條所在的直線呈45度角。

ELISA中加樣須注意如下問題：
1.  吸取樣品時，加樣槍吸頭不應黏附多余的液體；加樣時不可90度向孔中滴加液體，這樣會導致液體殘留在吸頭上，加樣不準確！

2.  不要將吸頭伸入孔中，一方面若接觸孔底可能壓彎吸頭，另一方面可能會將孔中的液體吹起來，加樣不準確！

正確的加樣方法應為45度，吸頭貼著孔壁加入，應注意：
（1）角度太小，會使液體殘留在孔壁上，導致加樣不準確！

（2）吸頭應當貼著管壁和液面的交界處！

    ELISA測定現通常為采用手工操作的以微孔板條為固相的測定模式，測定操作非常簡單，一般涉及到標本的收集保存、試劑準備、加樣、溫育、洗板、顯色、比色、結果判斷和結果報告及解釋等方面，其中任一步驟的不當都會影響測定結果，且尤以加樣、溫育和洗板等步驟為甚。