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    ELISA新手難免會遇到一些問題，前段時間我公司技術(shù)就收到兩位顧客的技術(shù)問題，今天的技術(shù)文章中，就把這兩位客戶的問題分享給大家，希望能幫助到遇到相同問題的同學(xué)！

    例1，客戶提問：競爭法ELISA測定抗原時，固定抗體，酶標(biāo)抗原和受檢抗原競爭與固相抗體結(jié)合，請問能不能用酶標(biāo)二抗（抗固定抗體的抗體）和受檢抗原競爭呢？為什么？難道因?yàn)橛H和力不一樣？但是不都是抗原抗體反應(yīng)嗎？親和力不應(yīng)該是一樣的嗎？
    技術(shù)解析：當(dāng)然不能了，二抗結(jié)合抗體的位點(diǎn)，和抗原抗體結(jié)合的位點(diǎn)，不相同！二抗與抗體結(jié)合的是抗體的Fc段，抗原抗體結(jié)合的是抗體的CDR區(qū)。就相當(dāng)于一個人抓手，一個人抓腳，結(jié)合的位點(diǎn)不一樣，構(gòu)不成競爭關(guān)系。

    例2，客戶提問： zui近才開始做Elisa，間接法檢測抗體。我大致的步驟是包被（4度過夜），PBST洗滌，封閉（5%脫脂奶粉），洗滌，加入一抗，洗滌，加入二抗，洗滌，我設(shè)置的陰性對照就是步直接在孔中加100ul 包被液，沒有加我的蛋白，照理說，沒有蛋白zui后就不應(yīng)該顯色，懷疑是二抗沒洗滌干凈所以才顯色，洗滌了至少5次以上，zui后還在紙上使勁拍干，但是zui后還是顯色，求高人指點(diǎn)~~（包被液是碳酸鹽緩沖液，稀釋液assay buffer: PBS：KH2PO4,Na2HPO4.12H2O,NaCL,KCL,Tween-20，我的一抗二抗都是用這個稀釋液配的，封閉液也是用稀釋液配的脫脂奶粉，沒有血清啊）
    技術(shù)解析：① 可能封閉效果不好；② 可能封閉液脫脂奶粉可以和一抗交叉反應(yīng)；③ 一抗沒有洗滌干凈；④ 加樣時操作出現(xiàn)錯誤。先確定封閉有沒有問題，洗的話二抗確實(shí)多洗幾遍沒錯，沒有洗板機(jī)，每次洗可以搖晃板子，每遍1-2分鐘，也可以多設(shè)置幾個陰性孔，觀察結(jié)果，看是不是沒洗干凈的問題。加樣盡量加到底部，避免沾壁。

                    

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