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技術(shù)文章

免疫組化問(wèn)題,上海恒遠(yuǎn)一一為您解答

閱讀:1321          發(fā)布時(shí)間:2018-7-23

    時(shí)間沒(méi)有等我,是你忘了帶我走 ,我左手過(guò)目不忘的的螢火,右手里是十年一個(gè)漫長(zhǎng)的打坐。轉(zhuǎn)眼間暑假已經(jīng)過(guò)去一半, 免疫組化問(wèn)題,上海恒遠(yuǎn)一一為您解答

1、染色過(guò)強(qiáng)

原因及相關(guān)解決方法

a 抗體濃度過(guò)高或孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng) 降低抗體滴度、抗體孵育時(shí)間:室溫1小時(shí)或4度過(guò)夜

b 孵育溫度過(guò)高超過(guò)37度 一般在室溫20-28度

c DAB顯色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或濃度過(guò)高 顯色時(shí)間不超過(guò)5-12分鐘,以顯微鏡下觀察為準(zhǔn) 

 

2、非特異性背景染色

原因及相關(guān)解決方法

a 操作過(guò)程中沖洗不充分: 每步?jīng)_洗3次每次5分鐘

b 組織中含過(guò)氧化物酶未阻斷 :可再配置新鮮3%H2O2封閉孵育時(shí)間延長(zhǎng)

c 組織中含內(nèi)原性生物素:正常非免疫動(dòng)物血清再封閉

d 血清蛋白封閉不充分:延長(zhǎng)血清蛋白封閉時(shí)間

 

3、染色弱

原因及相關(guān)解決方法 

a 抗體濃度過(guò)低、孵育時(shí)間過(guò)短:提高抗體濃度、孵育時(shí)間不能少 于60分鐘

b 試劑超過(guò)有效使用時(shí)間: 應(yīng)更換試劑

c 操作中添加試劑時(shí)緩沖液未瀝干 :每步滴加試劑前瀝干切片中多余的緩沖液

使試劑稀釋 (應(yīng)防止切片干燥)

d 室溫太低 :低于15度要改放在37度孵育箱孵育30-60分鐘或4 度冰箱過(guò)夜

e 蛋白封閉過(guò)度:封閉不要超過(guò)12分鐘

 

4、染色陰性

原因及相關(guān)解決方法 

a 操作步驟錯(cuò)誤:應(yīng)重試設(shè)陽(yáng)性對(duì)照

b 組織中無(wú)抗原:設(shè)陽(yáng)性對(duì)照以驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果

c 一抗與二抗種屬連接錯(cuò)誤:仔細(xì)確定一抗二抗種屬無(wú)誤

     上海恒遠(yuǎn)是一家專業(yè)從事“產(chǎn)品研發(fā)生產(chǎn)、市場(chǎng)銷售、技術(shù)服務(wù)”為一體的生物技術(shù)公司,公司生產(chǎn)的產(chǎn)品質(zhì)量有保證,含量高,能夠給實(shí)驗(yàn)帶來(lái)準(zhǔn)確的結(jié)果。如有需要可咨詢我司銷售人員,我們將竭誠(chéng)為您服務(wù)。

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