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根據實驗室技術案例，以下為大家分享免疫熒光技術的操作方法流程。

免疫熒光技術（immunofluorescence，IF）是根據抗原-抗體反應的原理，先將已知的抗原或抗體標記上熒光素制成熒光標記物，再用這種熒光抗體（或抗原）作為分子探針檢查細胞或組織內的相應抗原（或抗體）。用免疫熒光技術顯示和檢查細胞或組織內抗原物質或半抗原物質等方法稱為免疫熒光細胞（或組織）化學技術。

免疫熒光技術的操作流程：

（1）選取一抗時要來源于兩種不同的動物，我用的是來源于rabbit和rat的抗體，二抗則是不同熒光信號標記的，我用的是donkey anti-rabbit-FITC（綠）和donkey anti-rat-Tex-Red（紅）。

（2）我的做法是兩種一抗同時孵育，然后兩種二抗同時孵育。抗體濃度、孵育時間要仔細摸索，我感覺一抗4度孵育過夜比較好，背景比較清晰。

（3）我的陽性對照用的是陽性組織切片，陰性對照則分別是家兔和大鼠的IgG，熒光標記物對照是PBS+熒光標記物。

（4）封閉血清與二抗來源動物一致，我用的是10%的正常donkey血清。

（5）其余步驟同一般免疫熒光單標操作。

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