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呋喃唑酮代謝物ELISA檢測試劑盒樣本處理前須知

處理任何樣本時，都必須注意：

（a）實驗中必須使用一次性吸頭，在吸取不同的試劑時要更換吸頭。

（b）實驗之前須檢查各種實驗器具是否潔凈，必須使用潔凈實驗器具，以避免污染干擾實驗結果。

（c）衍生化試劑可于2-8℃保存半年。

（d）磷酸氫二鉀溶液可于2-8℃保存三個月

（e）鹽酸溶液可于室溫保存三個月

（f）氫氧化鈉溶液可于室溫保存三個月

（g）未處理的樣本冷凍保存。

（h）處理好的樣本可在2-8℃避光保存24小時。

（i）雞蛋樣本前處理過程中，50℃水浴2小時，中間每半小時必須用振蕩器劇烈振蕩1-2分鐘，它直接影響結果的準確性。

（一）肌肉、肝臟組織前處理方法

┅┅用均質器均質樣本；

┅┅接（四）的描述方法。

注：樣本應當在陰涼避光處冷藏保存

（二）牛奶前處理方法

┅┅取牛奶樣本，3000g以上，10℃離心10min，吸除上層脂肪；

┅┅取5ml去除脂肪牛奶樣本至10ml聚苯乙烯離心管中；

┅┅分別加入250ml C液和250ml D液（見配液3）；

┅┅用振蕩器充分振蕩混合，3000g以上，4~12 oC（39-54℉）離心10min。如果沒有恒溫離心機，則先將樣本降溫至大約8 oC（46℉），然后離心；

┅┅接（四）的描述方法

（三）蜂蜜前處理方法

┅┅稱取1.0±0.05g蜂蜜至50ml聚苯乙烯離心管中；

┅┅用4ml去離子水，用振蕩器振蕩至蜂蜜全部溶解；

┅┅加入0.5ml 1M鹽酸溶液（見配液4）和100ml衍生化試劑（見配液1），用振蕩器充分振蕩；

┅┅接（四）第二步描述方法（標 * 處）。

（四）接上面的方法

┅┅稱取1.0±0.05g均質后的組織樣本（肝樣/肉樣）、制備好的牛奶樣本上清液1.1ml（相當于1ml的奶樣），分別加入4ml的去離子水、0.5ml 1M 鹽酸溶液（見配液4）和100ml衍生化試劑（見配液1），用振蕩器充分振蕩2min；

*┅┅在37 oC過夜孵育（大約16h）；

┅┅分別加入5ml 0.1M 磷酸氫二鉀溶液（見配液2）、0.4ml 1M 氫氧化鈉溶液（見配液5）和5ml乙酸乙酯，用振蕩器劇烈振蕩30s；

┅┅3000g以上，室溫（20-25 oC/68-77℉）離心10min；

┅┅取2.5ml乙酸乙酯相至10ml干燥的玻璃試管中，于50～60℃氮氣流下吹干；

┅┅加入1ml正己烷（或正庚烷），用渦旋儀渦動30s，再加入1ml復溶工作液（見配液6），用渦旋儀渦動1min充分混勻；

┅┅3000g以上，室溫（20-25 oC/68-77℉）離心10min；

┅┅除去上層有機相，取下層水相50µl用于分析。

（五）雞蛋前處理方法

┅┅用均質器低速均質樣本（蛋黃或全蛋）；

┅┅稱取2.0±0.05g均質過的蛋樣本至10ml聚苯乙烯離心管中，分別加入4ml去離子水、0.5ml 1M 鹽酸溶液（見配液4）、200µl C液（見配液3），用振蕩器振蕩1min混勻；

┅┅加入200µl D液（見配液3），用振蕩器充分振蕩5min，3000g以上，室溫（20-25 oC/68-77℉）離心10min；

┅┅取全部上清液至15ml聚苯乙烯離心管中，加入200µl衍生化試劑（見配液1），用振蕩器充分振蕩，50℃水浴2h（中間每半小時用振蕩器劇烈振蕩1-2分鐘）；

┅┅分別加入5ml 0.1M 磷酸氫二鉀溶液（見配液2）、0.4ml 1M 氫氧化鈉溶液（見配液5）5ml乙酸乙酯，用振蕩器劇烈振蕩30s，3000g以上，室溫（20-25 oC/68-77℉）離心10min；

┅┅取2.5ml上層有機相，于50～60℃氮氣流下吹干；

┅┅加入1ml正己烷（或正庚烷），用渦旋儀渦動30s，再加入2ml復溶工作液（見配液6），用渦旋儀渦動1min充分混勻；（如出現乳化現象，請于60℃水浴中加熱5min，再重復離心）；

┅┅除去上層有機相，取下層水相50µl用于分析。

本試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在酶標板微孔條上預包被偶聯抗原，樣本中的殘留的AOZ經衍生化后和酶標板微孔條上預包被的偶聯抗原競爭抗呋喃唑酮代謝物的衍生物抗體，加入酶標二抗后，用TMB底物顯色，樣本吸光值與其所含殘留物AOZ的含量成負相關，與標準曲線比較再乘以其對應的稀釋倍數，即可得出樣品中呋喃唑酮代謝物的殘留量

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